做WB时目标蛋白iNOS条带

可能原因很多：1同源蛋白；2表位相似的杂带；3自身蛋白的修饰,糖基化,磷酸化等；4降解再问：那要怎么确认是什么原因造成的呢一共做了三次都出现这种情况再答：先看看旁边的带是多大。和你的同源蛋白大小类似吗

DTT不是上样的时候才加,可以在配制loadingbuffer的时候事先加好.你看看DTT的分子量,再算下该加多少克~

可能原因：蛋白上样量太少,蛋白转过去了,蛋白还没转到膜上去,丽春红灵敏度不够.你的蛋白是单一蛋白还是总蛋白?如果是总蛋白,而且上在同一道上,那就没必要做后面的了.很可能是转膜失败.

出现两条带是非常正常的现象.抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带；蛋白亚型表达的原因：我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白

没有条带的原因很多：主要原因应该还是一抗的问题,整个流程试剂没有更换的话,就考虑一抗吧.WB的外包公司很多啊介绍一家鼎国昌盛,我在这个公司做过,服务蛮好的.

分离胶的浓度的问题.

如果marker跑在胶上的话说明胶是没问题的,要么是你样品蛋白含量太低,可以将样品浓缩一下,也可以加大上样量；或者可能你配的胶的浓度有问题,这样样品可能跑不开,建议根据蛋白的分子量按照分子克隆选用分离

co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋

erk1/2就表示erk1+erk2分子量分别42,44.也有的抗体只识别其中之一.一般情况下磷酸化不会导致蛋白分子量增加.具体看抗体说明书.CREB容易出两条带原因是CREB和另外一个蛋白同源性太高

用这个方法复溶蛋白时很难完全溶解掉,样品处理很是个问题,应该是蛋白浓度不高.我做过类似的也是用这个方法,电泳出条带很浅甚至没有,很郁闷.再问：那你后来是怎么解决这个问题的呢？是bufferB溶解的时候

这个不一样的.ELISA相对来说要简单一些,订一个试剂盒,而组织处理的话,用PBS研磨,离心取上清就OK了.一般不用蛋白提取试剂,蛋白须保持天然结构.不可变性（除非试剂盒有特别说明）再问：提完单白后，

这么大.跑1.5-2小时吧其实跑到1小时以后电流就很小了跑起来就很慢了.所以时间长点没关系

失败可能非常大

可能有几个原因：一：上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看（你所用的缓冲液是不是很久了?）二：如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三：不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是

只用sephadex分离效果很差的,特别是分子量差异比较小的时候,基本没有什么分离效果.可以先过离子交换柱：阴离子交换和阳离子交换,这样能除掉很多的蛋白,在过sephadex.

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是WesternBlot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化

做western,抗体很重要.首先看你要用什么材料做实验,人细胞?还是其他动物的?如果做人细胞,那就要选用鼠抗人,或者兔抗人的抗体.抗原是人的蛋白,抗体来自于鼠或者兔,在有单抗和多抗的情况下,尽量选择

你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一

该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术.由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术.免疫印迹常用于鉴定某

题目不太清楚.你的样品是什么?会不会不纯含有其他蛋白.染色方法对不对?如果所需验证的蛋白含量很少,银染分辨率比考然高.会不会跑胶跑过头了?