基因组DNA做模板进行PCR扩增,设计引物

如果是用在原核上,没有多大的却别,但是如果用在真核上,cDNA扩增出来的产物就比DNA直接扩增出来的短.因为cDNA是RNA逆转录过来的,而DNA里面除了RNA上面相对的片段还有内含子的片段,在扩增的

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

SNP就是普通PCR,最简单的,因为SNP位点是PCR后酶切看产物条带的.再问：谢谢那普通的PCR是不是半定量的？我填资料他那个是普通半定量PCR的引物我不是很确定再答：和定量，半定量没有关系的。。引

现在最简便的方法是买全血DNA抽提试剂盒,技术已经相当成熟,里面一般都有使用说明.国产的就很好用了,而且便宜.

植物组织提取基因组DNA　　一、材料　　幼嫩叶子.　　二、设备　　移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒.　　三、

全部打断,加接头,然后引物设计在接头上.

PCR扩增一般只是扩增上下游两条引物之间的序列.不是.扩增一段序列,就是一段DNA双链,需要两条引物,分别和DNA双链的两条单链的3'端结合,然后扩增出两条引物间的序列.你需要详细了解下PCR的原理,

换一对引物试试再问：换了三对了，就是没有目标带再答：模板量少点不知道有没有用酶切来提高基因组PCR成功率这种做法哈如果你是在别的地方看到这方法可行就试试吧

可以直接用DNA模板,只要DNA模板质量够好.

可以低到皮克一下.我刚做了一个,只有10个细胞的DNA提取物.第一遍并没有条带,但是采用完全相同的试剂,把底物换为第一遍PCR的产物1微升.就有很强的条带了.所以只要你能确定引物设计没有问题,理论上只

Mmmmmm,这个问题啊,从你的描述确实是模板的问题了,导致PCR失败的模板问题无非两种：浓度和纯度,LS的兄弟说的不错,模板浓度太大不行,稀释做个梯度看看也许管用；另一方面,纯度的控制就没这么简单了

损失量很大.有大片段的纯化试剂盒购买的,应该用那种,效果好,我记得上海生工或者英骏之类的都有卖.泥样?腐殖质含量太高?如果是这样,应该在提取DNa之前脱腐处理,不过要控制好损失.具体的方面很多.腐殖质

引物不特异或者温度太低再问：我在质粒上做，峰图都很漂亮。引物BLAST也是很特异的，温度都设在58度，但是用基因组DNAP出来的峰就是杂乱无章，而且不管梯度稀释多少倍，峰图都没有显示出梯度来，崩溃了。

在两个外显子上设计上下游引物就可以再问：跨外显子是吗？再答：是的，在相邻的两个外显子上就好。

对PCR产物进行变性时加的染液应该就是变性缓冲液吧,应该买试剂盒里面会有.在94度上放置5分钟后迅速放在冰上防止DNA复性就是了.再问：你好，还在吗，在94度进行变性5min，这个过程和PCR循环是没

基因组做模板,最大的麻烦是特异性问题,特异性不好,杂带会比较多.有时引物设计的特异性比较好,常规pcr就基本搞定.建议你的模板量不要太大,在设置pcr条件时,先做5个稍高的退火温度,以扩增出更多的特异

一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会不知道模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以

不是.成功的一次扩增反应是一个引物与模板互补,在聚合酶作用下合成一整段子链,与另一端引物无关.不明的话去看一下PCR原理.

区分你的模板里面是否有基因组污染的方法：在做逆转录反应的同时,做一个阴性对照,其他所有都和实验组相同,除了不加入逆转录酶.得到RT-PCR产物后跑胶,如果该阴性对照里也扩增出来明显条带的话,你的模板就

当然可以.realtimePCR最终是对PCR的模板做定量,只是现在较多用于基因表达差异比较与分析,也就是mRNA的定量（RT-qPCR）,所以给生手的影响是用于RNA.但要注意的是,即使是mRNA,