如何把克隆到T载体上的基因,与表达载体连接

可以制品说明pMD18-TVector、pMD19-TVector是一种高效克隆PCR产物(TACloning)的专用载体.这两种载体分别由pUC18、pUC19载体改建而成,在pUC18、pUC19

用碱性磷酸酶

1）利用DNA连接酶便可以将目的基因（已经剪切下来的）连接到质粒载体上2）目的基因的获得：利用限制性内切酶（限制酶）.这种酶具有专一性...可以识别特定的回文序列来进行剪切.3）如果你想得到一种基因,

一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2

用大肠杆菌表达载体就行啊!问题就是,ORF要正确,表达的蛋白可能被降解,激素基因要把内含子去掉,启动子、终止子都要用大肠杆菌的等等.

将载体转入大肠杆菌,在含有Amp的培养基上培养,蓝白斑筛选阳性克隆,再提取质粒DNA,PCR检测就可以了.

T载体分两种.一种是末端带有A的典型的T载体,这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接,另一种是平末端的T载体,这种T载体末端没有A,它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的

目的基因和载体比例最好再核对一下,连接时间放久一点试试

克隆载体是环状双链DNA.PCR的原理：首先,当热变性,模板双链分开成两条单链模板然后,两条引物分别结合上各自的模板聚合酶,催化dNTP等进行引物延伸,成为两对长链模板,由于延伸的时间只够完成目的基因

现在商业T载体很多,比如的pMD系列,对你都是适用的.85bp产物应该比较好连接,你就按照片段、载体摩尔比5-10的样子,一般很容易连接上.再问：我直接让公司克隆的三博让我自己选择载体但我对此不了解；

首先要做的就是鉴定质粒的最小复制子.得到最小复制子后将多克隆位点、选择标记基因即可.如果要构建穿梭载体,则需要加上大肠杆菌复制子.或者,直接在大肠杆菌克隆载体非多克隆位点上插入鉴定的最小复制子.如果要

直接就能表达.目的基因由运载体运入宿主细胞,运载体上有启动子再问：克隆载体也有启动子么？再答：有因为目的基因通常都经过了修饰以便表达

就是利用基因工程首先提取目的基因从细胞的信使RNA中提取出P53基因构建基因表达载体将目的基因P53和载体-大肠杆菌质粒重组将目的基因导入受体细胞可以选择大肠杆菌或动植物细胞作为受体细胞,导入重组DN

一般来说很难同时连基因和载体相连,首先要用相同的限制性内切酶切割基因和载体,使基因和载体产生相同的黏性末端,才可以使基因和载体相连如果要将两个不同的基因同时连接到一个载体上,那就需要用相同的限制性内切

这个你单酶切最好是要过夜,而且跑电泳尽量时间长一些,如果有一条带,就说明差不多完全切开了,如果害怕不安全,可以把这条带切胶回收纯化,用纯化后的连接,自连的可能性会小一些

在基因工程中,携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的工具称为载体,载体实际上是具有运载能力的DNA.依据功能,载体可以分为克隆载体和表达载体.克隆载体用于在宿主细胞中克隆和扩增外援片段；表达载体则用

很简单,找一个正常的组织样本,再拿一个转基因的样本,提取RNA,反转录cDNA,做个半定量PCR,或者realtimePCR,测定目的基因（光合作用基因的表达量）,看有没有比control样本增加.（

启动子有自己的碱基序列会进行识别再问：大侠，如果我插入两个目的基因片段，如何控制他们两个的表达量呢再答：放在特定的培养基中基因的表达是先复制进行转录和翻译所以是由基因本身控制的

完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样；二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接（这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆

我认为有必要上传,毕竟品种不一样,上传的时候标记清楚即可