提DNA时,无水乙醇或异丙醇为什么要预冷
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/03 14:11:19
无水酒精和丙酮会使绿色褪去使实验失败所以不用
无水异丙醇工业级6000/t无水乙醇4000/t
主要是因为DNA在一定的盐浓度条件下才能更好地沉淀下来.如果你不急用其实可以沉淀过夜的.这样就可以少了75%乙醇洗涤的那一步,那一步主要是洗去多余的盐.急用的话就加吧,但是一定要用75%乙醇洗涤.
提问的女孩2011-1-13因为低温可以促进DNA的沉淀,在DNA量很少的情况(比如你的实验)可以提高抽提效率.不过如果DNA量较多时,常温也没问题,比如我们做小鼠脚趾的基因型鉴定时,都是常温操作的,
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个人认为DNA双螺旋最外层有亲水的磷酸,这就是它能融于水中而不能融于有机溶剂的原因!
二者没有什么本质区别.不过异丙醇沉淀效率高一些.用异丙醇沉淀的话等体积就可以了,用无水乙醇的话要用二倍体积去沉淀.
可以的全部直接用的,异丙醇的作用是析出DNA,75%酒精的作用是洗涤DNA,异丙醇直接可以用,75%酒精你自己用纯酒精配出来纯度未必有直接买来的高.
离心后看到沉淀没?用70%洗涤后,白色应该更加明显,要是白色沉淀没有了,那会不会是你的乙醇不是70%?还有就是,实验失败找原因很麻烦的,也很费时间的,最好,最简单的方法是按步骤重做一次.
我们当时做实验的时候没有遇冷.不过遇冷后会降低DNA的溶解度更容易提取!
这个是要看情况的.平常我们都用异丙醇沉淀,因为它沉淀效果比较好,但是异丙醇不容易除去,要用乙醇洗,乙醇就很容易除去啦
一般95%乙醇和无水乙醇都是可以用来沉淀DNA的,而75%乙醇一般是最后几步用来洗涤DNA的.
据说是异丙醇在低级醇里面能够比较有效地降低表面张力同时兼顾挥发性和溶解度,张力小对一些死角的清洗比较有好处,不过毒性比乙醇大些.无水乙醇清洁也是常用的方法.
1.DNA不溶于乙醇2.乙醇可以吸附水分子(极性相同),使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.3.附:乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间
异丙醇比较疏水,能很更好地沉淀核酸,用乙醇的目的是去盐,它比异丙醇更亲水,所以能去掉一些盐离子.有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度.在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇,乙醇的极性要强于异丙醇,
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因为低温可以促进DNA的沉淀,在DNA量很少的情况(比如你的实验)可以提高抽提效率.不过如果DNA量较多时,常温也没问题,比如我们做小鼠脚趾的基因型鉴定时,都是常温操作的,沉淀照样超多.
最好不要,因为究竟是有机溶剂,可能损坏面板.
酚氯仿抽提DNA后,会使溶液分层,上层为水相,含有DNA;中间为蛋白(有时看不到);下层为有机相.原因是酚氯仿可以使蛋白质变性,从而从溶液中析出,但是蛋白密度会小于酚氯仿,所以离心后它分布在中间;而D