根据一段序列如果制定PCr引物

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

1.登陆NCBI网站2.在上排找到BLAST,点击进入,我只用过Oldblast,你可以点击Oldblast的连接进入.3.找到Searchforshort,nearlyexactmatches,点击

去百度百科有

我很奇怪,你写的序列怎么没有方向呢?哪端是3’端?哪端是5’端?如果开头那个部分是5’端的话,你的一对引物的序列分别为：5’—gaatgtacgtgccgc—3'5'—actagctacaatcc—3

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

把这段基因输入设计软件里,调节引物位置,使变性温度在94度,退火温度=Tm-（5到10度）延伸温度72度左右,满足这些条件基本就可以了,当然还要根据实际情况多次实验得到最佳引物.如果你要扩增整个的基因

好像用这个软件设计引物的很少吧,我一般都用PrimerPremier5,或者oligo7.这种专业软件很多专业论坛都有说明书下载,比如生物秀、丁香通、生物谷什么的.

引物设计原则：1、长度：15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量

一定要的.正向引物：5'.CTTCGAAATTC3'反向引物：5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题：设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设

前提：你的这条序列是5‘--3’的吧正向引物5‘--3’：TGCAACTACGTCCAC反向引物5‘--3’：TCGGACAAGACGTGC再问：能说说为什么吗？再答：DNA是双链的，引物结合于一条链

我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段再问：我需要检测的分子，在nucleotide里找不

上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计

5':CGGAATTCACGCGCAAGATTAGGTGGGG3':CGGGATCCCCTTGGGAAGAAAAAGCAAG引物组成为：保护碱基+酶切位点+目的基因末端序列.由于你要扩增全部这段序列,

提出了一种改良的TDT加尾克隆基因5对于基因组测序已经连接载体的PCR是利用已知基因组DNA序列设计的特异引物和载体通用引物进行扩增

不是再答：对拓扑异构、长度、碱基比例排列、端处有要求。

PCR的目的是为了扩增目的基因小一点的基因可以直接合成但是大一点的基因就得用PCR扩增了引物是和目的基因的一端互补的单链DNADNN左边一个序列右边一个序列而且DNA的复制只能按照一个方向复制就是由3

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会不知道模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以

那你就去找一段序列,在两边设计引物,在引物的5端挂上酶切位点序列,P完之后就能链接进去