正向引物与反向引物的作用
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/08 12:04:40
同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深
正反向引物就是一个引物是从3端开始,另一个是从5端开始的.看分子生物学的书吧,里面有详细介绍DNA复制的啊,就是那些理论而已.解释的太简单了,我做过pcr扩增的实验,不懂得可以问我,我尽量回答.
不好意思,我没设计过引物,不过建议你到生物秀或是小木虫的论坛去看看,那里有很多这样的问题的
首先要看目的基因中是否含有该酶切位点,只有没有的才可以选.其次,如果需要做表达,需要考虑起始密码子,防止移码突变;第三要考虑标签用于后面的蛋白纯化.如果仅仅用来拿到目的基因,那只需要第一点即可再问:我
可以这样来说吧,首先你应该有一条已知的序列,反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物,在3'方向直接找一段序列作为正向引物.这样就OK了,这是引物的设计,至于其他条件可以参考相
一般PCR使用两条引物,前后各一条,与模版DNA结合上后,前后的引物形成复制起始位点,共同向中间扩增,直到连上,一次扩增完成.
做PCR是扩增DNA双链分子的..如果把DNA分子分为C,D两链DNA聚合酶只能合成5'-3'的DNA链.所以A引物是C链结合的B引物是D链结合的..这样才能高效扩增
引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-O
既然说是引物了,那当然跟在DNA复制时的作用一样啦,因为DNA聚合酶不能直接在一条DNA单链上复制,一定要先让一小段寡核苷酸与模板DNA互补配对,然后聚合酶才能在引物的一端继续复制下去.这样能降低复制
但引物只能是线性扩增,合成单链,应用cDNA合成,探针合成等;双引物可以指数扩增,合成双链,各种DNA片段的扩增、重组、突变等.PS:模板存在反向互补区域是不能用单引物扩增的,因为链内退火会优于两条链
跟你模版对比就可以了!延伸方向都是5‘--3’.
正向引物和反向引物是相对的通常以一个双链DNA(上面的那条链)的上游结合部位称为正向引物是从左到右的方向,也就是5-3的方向而下面那条互补链的下游结合部位称为反向引物其方向是从右到左的因为下面的链的方
酶切位点多数时候是反向回文结构,因此你看到的正向序列与反向互补序列是相同的,所以在两个方向的引物上看,酶切位点序列完全一样.
一定要的.正向引物:5'.CTTCGAAATTC3'反向引物:5'.CCGATCGGGAGA3'回答楼主的补充问题:设计正向引物时,该引物序列应该具有和你待扩增DNA序列接近5‘段处的序列.反向引物设
您应该使用巢式PCR来做这个实验.无论您是先提RNA再做反转录,还是直接从DNA中获得基因,考虑到模板的复杂性,都应当使用巢式PCR.建议您先从目的基因的上下游设计一段引物,即外引物,再根据目的基因上
可以找一下原始文献,或到ncbi里搜索一下.另外ncbi里有个premer-blast可以试一下.---中国西部生命科学论坛再问:primerblast主要进行序列比对,NCBI没有查询到。
一小段寡聚的DNA,一般有两个(一对),分为上游引物和下游引物,分别指导DNA两条链的聚合.它们主要作用有两个,一个是和模板特异性结合来指导taq聚合酶合成所要的片段.一个是提供一个3‘端的-OH末端
童鞋你画个图就明白了,这两句话没有矛盾啊.延伸方向是5端到3端,即是说新加的碱基要往3端添加不是吗?
pcr与引物的关系,pcr需要引物啊,其实引物就是扩增的目的片段两端的碱基互补序列.
DNA聚合酶工作时必须要有一个引物,它只能把新的核苷酸加到已经存在的核酸的3'-羟基上,RNA引物就提供这个羟基.