作业帮碱裂解法提取质粒过程中,EDTA.溶菌酶.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/09 00:30:56
溶液I里面有RNAse,常温下容易失活,所以一般冷藏储存保持活性；溶液III不需要预冷吧……
我也想知道,找了一下:酚是强烈的蛋白质变性剂,能有效使蛋白质变性而除去,氯仿有强烈的脂溶性,去除脂类杂质,本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质
非本人原创,转载自网络.认真看.质粒提取需要注意的提到了.溶液I,50mM葡萄糖/25mMTris-Cl/10mMEDTA,pH8.0；溶液II,0.2NNaOH/1%SDS；溶液III,3M醋酸钾/
（1）环状DNA（2）质粒胰岛素（3）质粒（4）细菌
加溶菌酶的低渗溶液再问：我想要具体的参数再答：试剂：溶菌酶100µg/mL40mmol/LTris-HCl，pH8.020mmol/L乙酸钠lmol/LEDTA1％SDS(十二烷基硫酸钠)5
首先加入溶液1,：改变细胞膜的通透性.加入溶液2：使细胞裂解,释放出质粒DNA和染色体DNA,在碱性条件下,破坏碱基配对,使这两种DNA都变性.加入溶液3：使DNA分子复性.此时,线状染色体DNA的两
还有可能是你的琼脂糖凝胶浓度太高了,浓度越高,分子筛效应越大,质粒又比较大,当然容易拖尾了.其次也可能是你的电泳电压过大；还有就是RNA污染,你提完质粒后没有用RNase降解,不过这就不叫拖尾了,称作
提取的话有专用的试剂盒（就是可以购买的快速完成特定实验的东西）,也有很详细的步骤,主要是配好几个溶液挨个来就行了,基本上就是破膜,然后清除掉其他东西最后把DNA溶解在TE溶液里接下来使用酶切试剂酶切,
我们是沉淀溶于TER（TE含RNaseA20μg/ml）,37℃水浴30min.
首先要知道,质粒是共价,闭合,环状的DNA（cccDNA）.以常用的碱裂解法为例：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒的cccDNA分子能够迅速复性,呈溶
细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体,提取后可用作构建基因表达载体.
用酚氯仿再次抽提.若对去除基因组DNA有要求,那么用核酸外切酶处理.再问：能不能再详细点？？？谢谢
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酚:氯仿:的目的是沉淀蛋白质原理如下：酞与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性过离心,变性蛋白质的密度比水的密
碱性条件下,染色体DNA双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键断裂但两条互补链彼此缠绕.恢复中性时,染色体DNA难以复性,质粒DNA分子很快复性,离心时染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来,而质粒DN
裂解细胞是为了获得其DNA,方法有很多种,超生裂解,碱裂解等等细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2.溶解蛋白；3.蛋白变性使其稳定；4.抑制蛋白酶活性一般细胞裂解液的成分
1.提取过程应尽量保持低温.2.提取质粒DNA过程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好,要将蛋白尽量除干净需多次抽提.3.沉淀DNA通常使用冰乙醇,在低温条件下放置时间稍长可使
基因组DNA可以提取,质粒DNA也可以提取,要看你需要的目的基因是位于基因组上还是质粒上,要哪个部分就提取哪个部分.在基因工程中,质粒是一个非常理想的载体,大部分的目的基因会先导入到质粒中进行扩增,所
以东盛生物的为例bufferP1：除去RNAbufferP2：裂解细胞bufferP3：沉淀DNAbufferWA、bufferWB：都是洗涤液（这两个之间有什么区别我也不清楚）TE：溶解DNA.
按步骤操作完就在离心管里了