作业帮mRNA设计引物在非cds区能扩出片段吗
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/10/06 08:01:59
呃,难道你不会设计引物?获取基因不需要用内参.内参是做表达分析时才用的.比如你做RT-PCR考察不同组织中HintI表达差异时才需要用内参的.
用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说
只能两头设计你不知道基因名字么实在不行拿序列去BLAST上比对下也能知道它前后是啥啦
构建载体需要酶切的,所以需要加接头的!
mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计
当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GCrich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GCrich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的
ATCG.原理就是体外环境模仿人体内环境,完成人体内的DNA复制,大概就这样.
一条引物应该与A链一端的序列一致；令一条引物应该与B链在令一端的序列一致.走向应该都是从5’到3‘向基因内部走.
要先在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed网址查询有关序列,再在PrimerPremier5软件中进行引物设计,主要要注意以下几个方面：①引物长度一般引物长度为18~3
一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.
cDNA再问：真核基因转染其他细胞时一般选择表达DNA还是mRNA?再答：转进去的是DNA。整合到受体基因，表达mRNA再问：那你研究某一基因时，若需克隆你是不是一般以DNA序列设计引物啊？若是以mR
cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.
用primerpremie
首先查道你的基因序列（NCBI搜）,第二查引物设计原则,第三下载个引物设计软件设计,简单好用的有primerpremier5.0,这些都能在网上搜到,软件用法也能搜到.
查到的是cDNA,直接粘贴就可以.
cDNA反转录DNA是由RNA反转录得到的,结构上少了内含子,可以用来建立DNA文库等EST(ExpressedSequenceTag)表达序列标签EST(ExpressedSequenceTag)表
一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有
与3’端结合,因为新链的生成（不管是DNA复制、转录还是反转录）都是由5‘端向3’端进行的,只有引物与模板的3‘端结合,才能保证新链由5’端向3‘端生成.
如果设计在内含子序列中,RT-PCR检测到的可能是未被剪切的preRNA或RNA中污染的核DNA,如果设计在外显子序列中,RT-PCR检测到的可能是成熟mRNA,未被剪切的preRNA或RNA中污染的
不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问：很多mRNA选择设计不同长度的引物，没有一对是无found显示的，真的很让人纠结；请问文献上的引物有的也是这样吗，不完美，但能扩出来，不会影响q