pcr中降低ct值有影响吗

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

是不是正态分布要做normaltest的然后要做levenetest然后根据你的组别是多少个,选择做ttest或者anova或者mann-whitney或者KWtest我替别人做这类的数据分析蛮多的

我们都自动假设这个两个前提的正确的了.只要你的引物特异性没太大问题这个可以从溶解度曲线上看出来没有杂峰什么的

就是cyclethresholdvalue的standarddeviation(STD.DEV).你做realtime的时候同样的样品肯定有replicate或者triplicate的.这个指标就是检

通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的,如果发文章,那么建议你控制在15到35之间吧

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

9CT是大格布11CT是中格布14CT是小格布再问：多大呢，例如，一格边长几毫米？再答：小格0.181CM中格0.23CM大格0.282CM

加样误差,或者浓度本来就低再看下你设置的基线是否不对再问：都是先配好mix液，混匀后再分加至每个孔的，应该误差不会很大吧（出现Ct值的大多在20左右）再答：有没有看看扩增曲线是否正常？或者你的模板质量

Ct值是通过PCR仪的分析软件直接得出的,一般要做一个看家基因座内参

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.

普通PCR?问题不大跑胶看看有没有条带就是realtime就不行了再问：普通pcr，taq酶

人工的吧,不是要看溶解曲线的峰的?

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来

博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般SG法采用72℃延伸时

△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,

因为等你实验不出结果时,你就得一个一个因素地排除了.空谷幽风(站内联系TA)肯定都会有影响!做PCR用的试剂除了酶就是buffer和dNTP,至于模板和引物不知道算不算你说的试剂,至少buffer里面