高AT序列PCR

直接发送给我,我帮你设计.

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

根本上说是已知核苷酸序列.如果序列知道了,它在什么基因上也就知道了（可以通过BLAST搜索的）.PCR的过程是这样的,你首先需要化学合成两条短的单链DNA序列,叫引物（可以直接叫一些公司帮你合成）,这

正向引物：5'CTTCGAAATTC反向引物：5'CCGATCGGGAGA(TCTCCCGATCGG的反向互补序列）当然,这对引物有些短,其实真正设计时上下游引物的序列中都可包含部分基因1的序列,以平

你是说PCR产物电泳出现多带或产物没序后有多种序列?总之,有可能是引物退火温度太低,错配的结果.建议提高退火温度或换引物.

给楼主找了个PCR技术指导,希望有点帮助http://bbs.biogo.net/read.php?tid=56483&keyword=PCR%BC%BC%CA%F5

请问你的目的是要P出这段基因全长,还是只需要其中一段就可以呢?如果只需要一段的话楼上那个引物就可以了,P全长的话引物的位置必须在最顶端,可以为：5'atgaggttcaatgtctcagg3'5'ct

什么跟什么说的太不清楚饿了只要你需要的那段序列是对的不就行了嘛跟引物序列有啥关系毕竟大部分的PCR引物设计都是在需要的序列两端隔一段距离而且如果你测序是拿PCR引物测的话那前面的几十个碱基都是测不准的

mRNA序列从NCBI上搜如果是常规PCR引物用pp5设计realtime引物搜别人文献里面报道的实在没有再自己设计

PCR扩增一般只是扩增上下游两条引物之间的序列.不是.扩增一段序列,就是一段DNA双链,需要两条引物,分别和DNA双链的两条单链的3'端结合,然后扩增出两条引物间的序列.你需要详细了解下PCR的原理,

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

试试吧.退火温度低一些50左右

这个方法叫做RACEPCR,你去查一下方法吧.再问：我做过race，这个常规的PCR，再答：那就是基因在环形载体上再问：也不是，就是一段大概1000多bp的基因片段，已知500多bp，然后老师设计的引

一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

一般来说,RT-PCR的时候很多情况下会不知道模板DNA的序列,可以在Genbank中寻找和你要扩增的物种的亲缘关系较近的物种的同源基因,多找几种,用DNAMAN或其他软件可以比对它们的序列,这样可以

PCR是用来扩增目的片段的,可以富集你想要的片段然后用来测序或者克隆基因,可以在这个片段上做点突变,甚至可以用来测定目的片段在原始模版当中的丰度（包括有无）.cDNA除了进行PCR,也可以用来做cDN

你说的这个PCR后片段的大小是指你插入到载体中的目的基因长度,还是整个载体的长度啊?你的问题表述的不明白.

我说说我的理解,仅供参考：你本来的意图,是通过载体线性化后,外源基因与基因组同源位点的双交换,将其整合入基因组中,对吗?如果说是整个环状质粒导入基因组,从理论上来说是有可能的,单酶切就可以了,而且概率