有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/08/29 02:01:29
有目的基因,293t细胞,如何用慢病毒载体整合入293t细胞,
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例):
第一天:
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天:\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS(从此刻开始算时间).
第三天:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天:
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天:
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
再问: 2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 这是什么东西?你的内容是包装试剂盒说明书上的吧,我要自己包装,但很多试剂我没有,比如Opti-MEM 脂质体2000
第一天:
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天:\x09\x09\x09
1.转染293FT细胞.
1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2.500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3.5min后,将,溶液混合,室温静止30min\x09
4.从6孔板中吸出1ml培养基,然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物.
2.6-10h后,移除含有DNA-脂质体复合物的培养基,代之以正常培养液DMED+
10%FBS(从此刻开始算时间).
第三天:
3.转染24h后,荧光显微镜下观察,转染效率应达到70%以上
第四天:
4.48h收获含病毒的上清,0.45um滤膜过滤,同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4.感染细胞:用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞.
第五天:
5.72h后再次收获病毒上清.将昨天感染的细胞离心去除上清,然后再次感染目的细胞.
6.一般感染48h后,就能见到明显的荧光.
再问: 2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G 这是什么东西?你的内容是包装试剂盒说明书上的吧,我要自己包装,但很多试剂我没有,比如Opti-MEM 脂质体2000
腺相关病毒载体携带目的基因转染细胞,目的基因整合到宿主细胞DNA上,为什么可以持续表达?
大家好,我现在做细胞实验开始需要构建目的基因的过表达,不知道应该选用慢病毒载体还是腺病毒载体,标书
载体是如何将目的基因整合到宿主细胞的DNA里去
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将目的基因导入动物细胞用到的载体只能是病毒吗?质粒可以吗?
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质粒载体携带的目的基因 怎样整合到受体细胞上的染色体上 一般细胞中含有很多条染色体 是每一个都整合么 还是整合一个上?谢
如何用标记基因检测目的基因导入载体
宿主细胞的DNA修复能切除病毒整合在宿主细胞上的基因吗
目的基因须由载体导入受体细胞