镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/01 07:04:30
镍离子亲和柱纯化蛋白的洗脱液和平衡液怎么配?
我第一次做蛋白,请尽量说详细点
我手上只有一个笔记,是这样写的
平衡液:50mM 磷酸钠
300mM氯化钠
洗脱液:150mM咪唑
具体的洗脱的步骤都有,
1.平衡液只有这两种成分这么简单吗?
2.洗脱液是水加咪唑还是平衡液加咪唑呢?
我第一次做蛋白,请尽量说详细点
我手上只有一个笔记,是这样写的
平衡液:50mM 磷酸钠
300mM氯化钠
洗脱液:150mM咪唑
具体的洗脱的步骤都有,
1.平衡液只有这两种成分这么简单吗?
2.洗脱液是水加咪唑还是平衡液加咪唑呢?
1.平衡液是缓冲液,应该是PB或PBS,这个配方很多手册可以查,注意亲和层析的pH是一个比较重要的参数,会影响洗脱过程的,有一种镍柱洗脱方法就是高pH上样,低pH洗脱.
2.洗脱液一般是平衡Buffer中加入咪唑,没有缓冲的体系有可能造成蛋白的变性.
2.洗脱液一般是平衡Buffer中加入咪唑,没有缓冲的体系有可能造成蛋白的变性.
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