pcr产物电泳时,用反转的dna的同一个样分别扩内参、目的1和目的2.内参和目的1都很好,目的2却很浅很浅?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/07/09 06:39:50
pcr产物电泳时,用反转的dna的同一个样分别扩内参、目的1和目的2.内参和目的1都很好,目的2却很浅很浅?
三者因所用退火温度,循环数不同,是分三次分别扩增的.之后电泳结果时内参和1非常好,2却非常浅几乎看不到.看到有些建议是加大模板量,既然我用同一个样,目的1能扩出来很好说明模板没有问题,模板的量也应该是可以的.并且目的2在该组织中并不是本身低表达的,我加大模板量有用吗?应该怎么办?另外,我把内参和目的1上到同一个上样孔里,buffer和样品分别该加多少?
三者因所用退火温度,循环数不同,是分三次分别扩增的.之后电泳结果时内参和1非常好,2却非常浅几乎看不到.看到有些建议是加大模板量,既然我用同一个样,目的1能扩出来很好说明模板没有问题,模板的量也应该是可以的.并且目的2在该组织中并不是本身低表达的,我加大模板量有用吗?应该怎么办?另外,我把内参和目的1上到同一个上样孔里,buffer和样品分别该加多少?
你是一直都这样还是单次啊?如果是单次的话建议换一批cDNA试试,因为做实验这种事情有时候分析得再合理,结果还是不靠谱,我前几天还有过内参p不出来的现象,目的条带都巨亮无比,又能说什么呢,有时候就是这么不正常~~~
如果是一直都这样,试过加大循环数和加大模板量都没有用的话,我还有一个不太常规的办法
你可以把你的目的2跑的胶切下来(就像是回收那样的切),放到EP管了,放到负20度冻起来,然后拿出来,化了之后ep管里会有几微升的水,把它吸出来当模板用,试试吧
当然有可能是引物的原因,你可以再看看目的2的引物看看有没有问题
如果是一直都这样,试过加大循环数和加大模板量都没有用的话,我还有一个不太常规的办法
你可以把你的目的2跑的胶切下来(就像是回收那样的切),放到EP管了,放到负20度冻起来,然后拿出来,化了之后ep管里会有几微升的水,把它吸出来当模板用,试试吧
当然有可能是引物的原因,你可以再看看目的2的引物看看有没有问题
RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方
用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致.
RT-PCR电泳照片做RT-PCR跑电泳时,只在一个孔中单独加了内参,其他孔中分别加了marker和目的基因,这样的照片
Real time pcr目的基因Ct值相差1,内参差不多是怎么回事?做了2次都这样,不想是加样的问题
请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确?
半定量rt pcr内参和目的基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR
RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些?
为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了
western blot目的蛋白和内参分子量差距太大怎么办?
用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致.
荧光定量pcr扩得出目的基因但是检测不到内参gapdh
PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常.