农杆菌GV3101转化质粒 热激法 的具体步骤是什么.越具体越好
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:数学作业 时间:2024/10/03 03:25:04
农杆菌GV3101转化质粒 热激法 的具体步骤是什么.越具体越好
可以按照常规的质粒转化方法来做
简单点的方法:
1.搞个感受态制作试剂盒,先把药转化的农杆菌变成感受态
2.加入要转化的质粒,冰浴半小时,42℃热激一分钟左右,要快速冷却下来(冰浴)
3.复苏一小时,涂抗性板
再问: 我要把一个构建好的重组质粒转入农杆菌。感受态已有 热激转化的步骤可不可以再详细些,连接也可以。具体加多少质粒之类。以前没做过....麻烦啦 谢谢您!
再答: 转质粒要求不高的,一般商业化的感受态怎样都能转出来的。 1.一管感受态加入10ng质粒足够,然后放冰上半小时 2.放入42摄氏度水浴锅,热激一分钟 3.拿出来放冰上5分钟 4.加入无抗性的液体培养基800ul,摇床复苏一小时 5.3000rpm离心,吸走上清液800ul,再将剩下的菌体与液体混匀,涂在抗性平板上 6.12小时后,等着挑单菌落吧
简单点的方法:
1.搞个感受态制作试剂盒,先把药转化的农杆菌变成感受态
2.加入要转化的质粒,冰浴半小时,42℃热激一分钟左右,要快速冷却下来(冰浴)
3.复苏一小时,涂抗性板
再问: 我要把一个构建好的重组质粒转入农杆菌。感受态已有 热激转化的步骤可不可以再详细些,连接也可以。具体加多少质粒之类。以前没做过....麻烦啦 谢谢您!
再答: 转质粒要求不高的,一般商业化的感受态怎样都能转出来的。 1.一管感受态加入10ng质粒足够,然后放冰上半小时 2.放入42摄氏度水浴锅,热激一分钟 3.拿出来放冰上5分钟 4.加入无抗性的液体培养基800ul,摇床复苏一小时 5.3000rpm离心,吸走上清液800ul,再将剩下的菌体与液体混匀,涂在抗性平板上 6.12小时后,等着挑单菌落吧
农杆菌转化的具体步骤是什么?
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