【求助】请问有做过大鼠动脉匀浆测SOD,MDA的吗?

【求助】请问有做过大鼠动脉匀浆测SOD,MDA的吗?

请教各位战友
我现在正准备作大鼠动脉匀浆测氧化应激指标,SOD ,MDA.有以下几个问题：
急需指教?我也没做过动脉匀浆,但做过其它的脏器的,我就我的经验说说,
1,一般来说,应该有0.1g左右,
2,建议用电动的匀浆器,估计动脉管韧性强,不好匀浆.一般用生理盐水作为匀浆液.需要注意的是,匀浆时应在冰水浴上进行.
3,可以的,一般是3~5倍体积的生理盐水.我做过脑部匀浆,组织和生理盐水1:9比例,冰上匀浆,其实玻璃手动的就可以了hanmeimei456 wrote:请教各位战友
我现在正准备作大鼠动脉匀浆测氧化应激指标,SOD ,MDA.有以下几个问题：
3 血管这么细,这么少,能匀浆出东西来吗?急需指教?我的硕士论文中有动脉匀浆部分,也有SOD和MDA指标的内容.
1：你的意思应该是大鼠胸主动脉.一般来说如果取的合适,能取15mm的胸主动脉,我一般都是把一半用于组织离体培养,另一半用于测定氧化指标.
2：其实匀浆机非常简单,常州电机厂有种简单的电动机,只需要在上面接上金属棒然后用胶带固定,再把研磨棒用胶带固定于其表面,研磨即可.桌面放置一冰浴铁盒,必须让你的研磨磨砂玻璃瓶充分在其冰浴体系内部,否则高速研磨下,如果自然环境下酶迅速被分解失活了!关于冰的制备,就是找个塑料盆放在大冰柜中过夜,第二天拿来,把底部向上放置,用自来水一冲,部分融化,然后把盆一提,呀,冰掉出来了,然后提起来,扔在地上,呀,冰就成碎片了!然后放到盆里,你不用管那些冰受到污染了啥的,污染不污染没关系,我就受不了别人做个试验不必要的也小心翼翼的.
所以匀浆,当然电动的,不过是半自动,因为你手还需要不停旋转.匀浆液当然要用生理盐水了,自己配备即可,0.9%,真正实验室用都是自己配.一定要分三次加入,按照血管称重的重量,配成5% 的,或者按你需要,你会发现很少的生理盐水,还要分三次加入,肯定要有一些损失的.
3：当然能匀浆出东西了!酶本身就少,又不是脂肪那么多.
ps：注意一些要点,如不注意,你实验可能失败.
4：冷冻离心机是非常必要的,如果没有条件,那就低速,常温离心,不过不推荐.酶常温暴露活性会降低,而且高速旋转,离心机的轴摩擦产生热量,而且离心时本身分子运动产生热量,加速酶降解.
5：你应该建立了心血管疾病模型,然后一边做血管实验一边做酶活性的吧?或者你采取血管离体损伤液模拟培养?那你取血管的时候,称重比例就要仔细斟酌,而且培养的天数也会有变化,因为你试验会发现,一只动物 模型光取血管就弄死,实在太浪费,而且你导师不一定允许,就需要从血管的药物peuiyang 浓度和天数上下功夫,长度不够,就从深度上扩.
研磨管要准备多个,洗完用生理盐水多次冲洗,研磨前将血管组织剪碎以减少研磨需时,研磨过程中随时注意不要转速过快,不要形成泡沫,注意转速和控温.
实验进程和步骤要提前设计好表格,否则容易出现失误.暂时就这些