RT-PCR扩增条件问题
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:语文作业 时间:2024/08/27 01:48:21
RT-PCR扩增条件问题
我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,因为样本太多.每个样本都达到了平台期的,并且我所加的mRNA的模板数、引物量、dye、mix都是一样的.但是我在扩增的时候,为了达到最大的扩增效率,这六个基因我都分别采取了不用的扩增温度、循环数,这样各组得出来的CT值具有可比性吗?期待尽得到答复,谢谢……
我是做real-timePCR,需要测定六个基因的mRNA表达差异.这六个基因我是分开来扩增的,因为样本太多.每个样本都达到了平台期的,并且我所加的mRNA的模板数、引物量、dye、mix都是一样的.但是我在扩增的时候,为了达到最大的扩增效率,这六个基因我都分别采取了不用的扩增温度、循环数,这样各组得出来的CT值具有可比性吗?期待尽得到答复,谢谢……
应该可以,CT只是和你初始的mRNA表达量有关,当然的是在各种酶和原料充足的的情况下,和循环次数没什么关系 不过有问题的就是你的荧光蛋白发光会受到温度影响的,你只能大概的比较下,表达量大的话还好,如果差异小的,建议重新做一下