需要将目地片段与细菌连接重组表达.是否应先设计目的基因和细菌的引物?怎麼设计?是否需要知道全序列?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/10/06 00:27:54

需要将目地片段与细菌连接重组表达.是否应先设计目的基因和细菌的引物?怎麼设计?是否需要知道全序列?
还需要双酶切,引物要如何设计?

与细菌的质粒连接重组吧?
要将基因表达就把基因连在表达载体上即可
基因的引物是一定要设计的
细菌的引物是什么东西?
引物设计原理就是碱基互补配对还有DNA聚合酶（Taq酶）需要的反应条件以及一些注意事项
你这一分不给实在不想多说
再问：没错，是与细菌的质粒连接重组。是否需要细菌的信号肽基因全序列？如果需要怎麼得到信号肽全序列？基因的引物设计是否要先知道全序列？要怎麼设计引物？实在不懂，还请赐教。若真能解决问题，把我现有的分都给你又如何
再答：细菌信号肽？？？你发明的么据我所知信号肽是蛋白定位用的定位在细胞器或细胞膜上至少得酵母那种真核细胞才会有吧不需要知道全序列需要知道部分序列即可引物设计的话在目的基因的两端 5‘端到3’端重叠22bp就行了另外在5‘端加上你要用的酶切位点看你要连什么载体上了第一次做的话连一个T载体就行了 T载体是 PUC18或19 的衍生连T载体不需要设计酶切位点只要PCR之后用Taq酶加A 即可与T载体连接追加点分就加QQ聊吧刚好本人就是做这个工作的
再问：非常感谢你！对我来说你就是专家啦。我是不太懂这些东西的。我还想问一个问题。目的基因怎麼找？GENBANK找出来一大堆，哪一个才是我需要的，如何判断？
再答：你想自己做实验吗。基因网上能查到去NCBI就可以要懂英文加上耐心即可。基因模板就要看你能力了能找到什么是什么常见的基因还好说比如人体的基因植物的基因等要是细菌真菌可能麻烦点。比如你想克隆一个人类基因，先查找到基因序列，然后取血液，提取基因组，然后设计引物设计探针做PCR，接着做southern blot 分离模板，然后再PCR，然后纯化PCR产物，然后就可以连在T载体上了，然后再把基因酶切就可以连在其他表达载体上。事先提醒，细菌系统没法完整表达人类等高等动物的基因，或许你要尝试做酵母，方法类似

大侠们,我现在做PCR,用的是师姐设计的引物序列,怎么才能知道目的基因片段的大小请你设计一个实验验证细菌的生活是否需要有机物 PCR引物设计中,引物上是否需要每个碱基都与模板链结合? scleraxis的基因序列设计引物如何在知道基因片段的情况下,设计引物? 各位高手请问一下Burkholderia菌是属于细菌,我可以用3'RACE方法扩增其全基因序列吗?引物怎么设计已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! PCR的条件是已知目的基因的核苷酸序列?既然知道目的基因的核苷酸序列,为什么还要设计引物呢?直接根据已知序列写出引物核苷构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计? 我想问根据同一个基因设计的两个引物,都在小麦中扩增,扩增片段大小是否一样? 关于引物和目的基因的关系.针对某基因设计的同一对引物在不同人的基因组中扩增的片段一定一样吗