pET28A质粒双酶切后回收不到?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/07/17 11:05:02

pET28A质粒双酶切后回收不到?
用takara 的BamH1和Hind3双酶切pet28a(+)质粒,跑电泳切下目的带,用takara胶回收试剂盒回收酶切片段,回收后跑电泳,竟然什么也没有.回收之前量还可以啊,重复了好几次都没成功,与其他基因片段一起回收,基因片段出来了,pet双酶切却还是没有.换了其他几个牌子的胶回收试剂盒也一样.
实在没办法就用DNA片段纯化的试剂盒来去除酶和BUFFER以及小片段等,结果还是回收不到.
这个太奇怪了.
酶切时间是1个小时左右，问题是和外源一起回收，外源回收得很好，就是Pet28a回收不到。

虽然各家试剂盒都说自己的回收率有多高多高,但胶回收的效率本来就不高,我回收的东西基本上就没有能跑出来的,不知道是不是我用的琼脂糖有问题,但是能再连上,你在溶的时候少溶点水,20-30ul左右就够了,65度预热,离完一次后把溶液再吸上来再洗一次,能稍好一点,完了不用检,也检不出来,直接与片段进行连接转化就是了,一般都能长出来,虽然不多,可是一个斑就够了.

英语翻译本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了怎样用PET28A构建原核表达载体质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒和质粒抽提试剂盒用英文怎么写?要标准的质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗? 请问用PCR克隆已知基因的步骤中为何要将回收的目的基因重组在大肠杆菌质粒上去呢? 汉译英两个词可回收,不可回收.并对所翻译的作以解释.recyclable这个词我在字典上查不到,另外recycle和re 质粒和Ti质粒有什么不同? 节能灯回收, 回收近义词酵母菌存在质粒吗? 回收硝酸银回收银浆 ,