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如何将受体细胞通过植物组织培养技术培养成植株

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/06 03:44:48
如何将受体细胞通过植物组织培养技术培养成植株
如何将荧光蛋白基因(限制性内切酶、聚合酶等)加在质粒上,导入受体细胞?
养方法
  1、非试管微组织快繁   非试管微组织快繁技术是将外植体(一般要求带一叶一芽)放置在室内外普通沙子培养基上进行培养,利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的.一般植物7~15天可以生长出根系.此技术投资低,操作环节少.   2、试管组织培养   试管组织培养是将外植体(即离体组织、器官或细胞)放置在组培瓶等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得组培瓶苗.
培养步骤
  第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗.把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放人为宜.置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜.易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗.流水冲洗在污染严重时特别有用.洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水.洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触.当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温.   第二步是对材料的表面浸润灭菌.要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等.用70%酒精浸10~30秒.由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长.有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间.处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料.   第三步是用灭菌剂处理.表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1—2种使用见表.第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3-l0次左右.无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞.②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟.③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大.④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用.⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果.
再问: 如何将荧光蛋白基因(限制性内切酶、聚合酶等)加在质粒上,导入受体细胞?