全长cDNA PCR已知cds序列的开头20bp左右作为forward primer,结尾的20bp左右互补序列作为re
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/08/31 08:44:33
全长cDNA PCR
已知cds序列的开头20bp左右作为forward primer,结尾的20bp左右互补序列作为reverse primer,Tm值相差不超过5度.用total RNA 的 T7 RT cDNA作为模版,准备扩增全长cDNA序列,但是总是p不出产物来,是什么原因呢?
我p的是全长cDNA,引物就是开头和结尾的20bp左右序列。按照TM和CG调整的长度。
产物用来做gateway的,所以不可以凝胶提纯。
做过gateway的高手来啊,我再加50分了。
5'UTR大概300多bp,3'有1000多bp,应该不算短吧。
还有我是分2步加上那个重组段的,第一次pcr的结果只有一条带,然后用第一次的产物做第2次的pcr
既然第一次只有一条带,说明没有不同剪接本阿。第二次的结果却有拖带。
不过既然凝胶提纯没有问题的话,我也试试看吧,我们实验室用的是promega的Wizard SV Gel and PCR clean-up system,
已知cds序列的开头20bp左右作为forward primer,结尾的20bp左右互补序列作为reverse primer,Tm值相差不超过5度.用total RNA 的 T7 RT cDNA作为模版,准备扩增全长cDNA序列,但是总是p不出产物来,是什么原因呢?
我p的是全长cDNA,引物就是开头和结尾的20bp左右序列。按照TM和CG调整的长度。
产物用来做gateway的,所以不可以凝胶提纯。
做过gateway的高手来啊,我再加50分了。
5'UTR大概300多bp,3'有1000多bp,应该不算短吧。
还有我是分2步加上那个重组段的,第一次pcr的结果只有一条带,然后用第一次的产物做第2次的pcr
既然第一次只有一条带,说明没有不同剪接本阿。第二次的结果却有拖带。
不过既然凝胶提纯没有问题的话,我也试试看吧,我们实验室用的是promega的Wizard SV Gel and PCR clean-up system,
首先保证你的cDNA的质量.你的基因5'UTR和3'UTR多长?如果5'UTR过短导致你的CDS起始密码子过于靠近cDNA5'端,那么即使少量的降解也会大大降低你的扩增效率.
其次,如果你保证了cDNA的质量,那么产生的过大条带可能是不同的剪接本.你应该详细检查你的序列是否存在具有多个剪接本的可能.
还有,我怎么没听说过gateway载体不能用凝胶回收的?很多实验室都是胶回收后连接gateway载体的,只不过洗脱的时候用dd水洗脱就行了.
其次,如果你保证了cDNA的质量,那么产生的过大条带可能是不同的剪接本.你应该详细检查你的序列是否存在具有多个剪接本的可能.
还有,我怎么没听说过gateway载体不能用凝胶回收的?很多实验室都是胶回收后连接gateway载体的,只不过洗脱的时候用dd水洗脱就行了.
已知一个cDNA的3'端部分序列,得到该基因的全长cDNA
cDNA与mRNA是相同还是互补的序列?
我想给一个基因的全长测序,可是序列很长,共23166 bp的DNA,请问能否测?需要分段PCR吗?
一条非全长基因序列荧光定量pcr引物如何微调(指用primer或primerselect设计出的引物总是不太好)
基于时间序列matlab的BP神经网络预测
为什么DNA测序很难测出500bp以上的序列
已知一个小鼠的基因完整序列和CDS序列,请问如何查找这个序列在水稻中的同源基因序列
如何找到一段mRNA序列的CDS序列
PCR技术中“作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次扩增中”,这是对的吗?
克隆出牛的leptin基因的cdna全长序列?(用race)
想获得完整的cds序列,
如何筛选得到猪的CDS序列?