对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法?列举一种或以上方法并说明其原理

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/11/08 20:42:43

细胞鉴别试验的方法有多种,根据检测目标分类包括细胞水平（形态、分类特征）、染色体水平、分子水平（生化、酶学、分子生物学特征）；根据方法学分类,包括细胞遗传学检测,免疫学检测,生物化学检测和分子生物学检测等.目前,常用的细胞鉴别试验方法包括细胞形态学检查、种属特异性抗原的检测、染色体核型分析、同功酶分析、限制性内切酶分析等等.
细胞形态学检查：通常在细胞接种24小时和48小时后,用100倍显微镜检查,观察细胞在低密度和高密度生长时的形态.这种方法比较直观,但只是一个比较粗略的鉴别方法,并且与检测人员的经验密切相关.
种属特异性抗原检测：也就是用种属特异性抗血清来检测种属特异性抗原,比如间接免疫荧光抗体染色.这种方法操作起来比较简单,但是试验敏感性较差,也就是如果存在少量的细胞污染不能分辨出来.
染色体核型分析：多数情况下,不同细胞的染色体结构是有明显差别的,因此可以利用这些差别进行细胞种属的鉴别.但是需要提醒的是,亲缘关系接近的灵长类动物细胞的染色特征就比较接近,因此要注意仔细辨别每一谱带的特点.试验时,应从同一世代不同细胞培养瓶中取细胞混合再培养,制备染色体标本片.染色体标本应长期保存（直至褪色不能用为止）,以备复查.染色体核型分析是一个比较精确的检测方法,但试验操作比较复杂,需要对试验人员进行培训.
同功酶分析（Isoenzyme Analysis）：不同种属的细胞所表达的同功酶是不同的,因此可以利用同功酶分析来进行细胞的鉴别.该方法通常检测以下四种同功酶：葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）、乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）和核苷磷酸化酶（NP）.试验时,通常要设一个小鼠源细胞（如L929细胞系）标准品和人源细胞（如Hela S3细胞系）的对照品.检测性能比较可靠,但是价格比较昂贵.
限制性酶切图谱分析（restriction digest analysis）：首先,使用商品化试剂盒或其它方法提取细胞基质的基因组DNA,一般要求细胞数在2～5×106细胞,并进行核酸定量,然后进行限制性内切酶的消化,再进行琼脂糖电泳观察电泳条带的特点.这种方法可操作性较好,灵敏度较高,不仅可以鉴别细胞种属,对于细胞间交叉污染的检测也是相当灵敏的,但是公认具有种属特异性的内切酶的选择是本方法的关键.
随着分子生物学技术的发展,许多新的技术方法也开始应用,如种属特异性的β－球蛋白或其它特征性基因片段的PCR方法、DNA指纹分析、HLA表面抗原鉴定试验等.这些方法的检测灵敏度和特异性均较前有所改进,但其可操作性如何,还需要进行不断地实践.由于不同的细胞鉴别试验方法具有不同的检测特性和灵敏度,因此应结合具体细胞的固有特性进行适宜的组合和选择,但最终应以实现正确鉴别为目的.

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