有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?

有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?

一、SDS-PAGE电泳所用溶液：　    1）30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)　　丙烯酰胺 (Arc)                            29 g　　N,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis)                  1 g　　用双蒸水定容至100mL,过滤备用,4℃存放　　丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存.
　    2）5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)　　Tris碱                                 15.1 g　　甘氨酸(电泳级)                          94 g　　10 %SDS                               50 mL　　使用时稀释5倍使用
　　3）2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)　　0.5 mol/L Tris-Cl  (pH 6.8)         2 mL　　10％(W/V)SDS                  4 mL　　甘油                           2 mL　　β-巯基乙醇                    1.0 mL　　(DTT（二硫苏糖醇）            0.31g)　　溴酚兰                        0.02g　　双蒸水                       0.5 mL　　室温存放备用 　　4）考马斯亮蓝染色液　　考马斯亮蓝R-250 （G-250）             1.0 g　　甲醇                                 450 mL　　冰醋酸                               100 mL　　ddH₂O                               450 mL　　0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸,定容至200mL,过滤备用　　       5）考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好,但有毒性）　　甲醇                                 100 mL　　冰醋酸                               100 mL　　ddH₂O                                800 mL 　　医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V) 二、SDS-PAGE所需溶液:　　A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g,加入去离子水定容至100mL,pH值不能超过7.0,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存.B液——1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱,溶于80mL（40mL）去离子水中,加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8,定容至100mL（50mL）.C液——1.5mol/L Tris·HCl,pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱,溶于80mL（40mL）去离子水中,加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8,定容至100mL（50mL）.D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶.E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用.　　F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液,室温保存.  三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 表1.配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
成分配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/mL
 510152025304050
10 %胶
水1.94.05.97.99.911.915.919.8
30 %丙烯酰胺混合液1.73.35.06.78.310.013.316.7
1.5 mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.5
10 % SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5
10 % 过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5
TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02
 
12 %胶  
水1.63.34.96.68.29.913.216.5
30 %丙烯酰胺混合液2.04.06.08.010.012.016.020.0
1.5 mol/L Tris(pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.5
10 % SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5
10 % 过硫酸铵0.050.10.150.20.250.30.40.5
TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02
 表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液
成分配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml
 123456810
水0.681.42.12.73.44.15.56.8
30 %丙烯酰胺混合液0.170.330.50.670.831.01.31.7
1.5 mol/L Tris(pH6.8)0.130.250.380.500.630.751.01.25
10 % SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1
10 % 过硫酸铵0.010.020.030.040.050.060.080.1
TEMED0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01