在做DNA提取的时候,蛋白酶K的浓度会影响实验结果吗

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/07/14 04:23:08

在做DNA提取的时候,蛋白酶K的浓度会影响实验结果吗
在配蛋白酶K的时候,我不知道那个试管只能加到1.5ml,就直接在5mg的蛋白酶k里加入了2500ml的去离子水,在琼脂糖凝胶电泳的时候DNA跑出的不是很多,我想知道和蛋白酶K的浓度是不是有关系
就像我说的情况，是不是蛋白酶配的浓度不对那？我是拿移液枪仪的

应该是有关系的蛋白酶K的主要作用就是水解蛋白质的可以将蛋白质与DNA很好的分离如果蛋白酶的含量少的话当然就会影响蛋白质的水解程度所以提出的DNA 的含量和纯度都会受到影响
再问：就像我说的情况，是不是蛋白酶配的浓度不对那？我是拿移液枪仪的
再答：蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml 20mg/ml蛋白酶K配制标准：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。避免反复冷冻你配的是2ug/ml　应该是浓度太低了
再问：谢谢，但是为什么琼脂糖凝胶电泳的时候给别人看说蛋白质太多了，是不是就是因为蛋白酶K的浓度低，所以才会出现这样的现象，而且DNA几乎没跑出来
再答：别人说蛋白质太多了？他是怎么看到有蛋白是的条带的呢你用的应该是EB给DNA染色的吧看到的应该是只有DNA的条带呀溴化乙啶只和DNA结合镶嵌到DNA分子中的呀？这个我也很是不理解
再问：恩，就是用核酸染料染色的，不知道学姐是怎么看的，我也不懂。。。有点抓狂，因为昨天做了三十多个样，只有个别的三五个跑出来了，我在想是不是蛋白酶的问题，还是因为和我一起做实验的那个同学，在最后一步的时候没有把离心管里的东西倒干净直接加的TE，我们做的是鸡血
再答：其实 DNA的提取是很有难度的因为这么大的分子量很容易就会断裂的即使再小心的操作有时候也是什么都提不出来的不知道你的具体方法是什么不过我们一般最后一步都是用0.6倍的异戊醇来沉淀DNA 然后用70%的乙醇来洗DNA沉淀然后自然干燥掉乙醇再加入TE 这样的化就会去除一些杂质
再问：恩恩，对，就是和你的一样，中间不是还有一个是要把液体都到掉吗？能把QQ给我吗？我还有想不同的地方。
再答：我的邮箱guanjiawei1991@163.com

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