我想问一下菌落pcr产物的大小是怎么组成的?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：数学作业时间：2024/09/29 20:40:55

有点理解不了你想问的具体是啥,希望你能补充下你的问题详细一点
再问：就是说产物的大小，是我的目的基因的大小，还是需要加上载体序列以后的大小。因为测序回来后的长度和我的长度差了1000bp左右呢，不明白怎么回事。
再答：呵呵你送测序送的是转化子菌液还是PCR产物片段啊如果是送的转化子菌液，那么测序公司会使用和你的载体相匹配的通用引物进行测序，一般一代测序技术的一个测序反应的长度是800bp，如果超过这个长度需要进行若干次测序反应，然后测序公司会把几次测的结果进行连接，并把连接后的序列发给你。测序结果的长度其实不是问题，关键在于你预期得到的序列是不是已知的，比如你要构建鸡白介素1的文库，那么构建好之后，你把转化子菌液送测序，你手里肯定有从NCBI下载得到的鸡白介素1的已知序列，那么只需要把测序结果和下载得到的已经序列进行比对就可以了，比对软件可以使用DNA Man。如果你要测序的片段是未知序列，可以将载体连接外源片段两侧的一小段序列分别和测序结果进行比对，这样就可以定位你连接的外源片段在测序结果上的位置，这样定位之后，你就可以知道你连接在载体上的片段到底有多少个bp了。至于你说的菌落pcr，你进行菌落pcr的时候使用的引物是外源片段的引物么，如果是的话，那么pcr结果的片段长度应该和你测序结果中的定位后的中间的外源片段长度相等。也就是说测序结果一般会在上下游两个方向多于你真正要测的外源片段的序列。完全手打，不懂就继续追问

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