用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/10/02 22:23:39

用T4连接酶做载体连接为什么一直连不上

连不上的因素比较多,首先你要先确保载体和基因片段已经用相同的内切酶处理好,然后再看连接体系中你所加的载体的量和基因片段的量是否合理,一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好,还有就是你的连接体系各种成分是否还有较,连接条件和连接时间是否充分,如果这些都没有问题,那可能就是酶的问题,建议使用TAKARA的连接酶,品质好,连接稳定.
再问：就是TAKARA的连接酶，试了好多次了，一直连不上
再答：那我觉得还是载体与基因片段的问题，你酶切好后纯化回收酶切产物，将目的基因和载体分别电泳看看，然后根据条带的亮度，大概下相同的体积两者的分子个数的比，然后定好载体与基因片段的比例，如前面所说的，两者的分子摩尔比最好在1:5-1:10之间

T4连接酶可以连接平末端,一样可以连接粘性末端,好像比DNA连接酶厉害的感觉,为什么通常都用DNA连接酶? 为什么T4噬菌体会有DNA连接酶? t4噬菌体为什么能提取出t4 dna连接酶? T4噬菌体DNA连接酶连接DNA的特点用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 现在的T4中带有一个叫PEG4000的东西.我做载体连接的时候用加么?加多少啊,别人都没加啊~ DNA连接酶把目的基因与载体的黏性末端的碱基对连接起来, 冈崎片段为什么要用DNA连接酶连接?DNA连接酶不是只作用于平末端或者粘性末端吗? 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! dna连接酶可以把目的基因与载体的粘性末端的碱基粘合形成重组dna,为什么错? DNA连接酶连接粘性末端的碱基对为什么是错的啊目的片段连接表达载体后酶切出非特异带为什么