pCAMBIA1301和目的基因质粒,都用Kpn I 和Xho I双酶切,回收后亮度挺好的,为什么连接转化总是不长

为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的? 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 一个质粒和一个目的基因,上面都有两种酶的切割位点,为什么用一种酶切后,再连接,有三种连接产物,而... 如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基中表达,怎样区分和筛选出目的基因? 高中生物 质粒基因工程中为什么质粒有抗病基因那么改质粒进入细胞后细胞就能抗该病,质粒是目的基因载体,它和细胞是两个分开的 如何区分质粒与质粒的复合体和质粒与目的基因的复合体 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗 转化后的重组子进行PCR,扩增出来的是目的基因还是整个质粒?为什么DNA测序是在转化后才进行? “基因工程中切割目的基因和质粒的限制酶可以不同.”为什么? 用来切割质粒和目的基因的酶是否必须为同一种酶?为什么