二次PCR需要注意什么问题
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/01 17:22:08
二次PCR需要注意什么问题
去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛?>>> 二次PCR实际上与AFLP基本一样,做AFLP一般要进行预扩增和选择性扩增,而选择性扩增就是二次PCR.
有时在预扩增后直接取样品做选择性扩增,条带数很少,而且在PAGE觉上染色不明显,背景很深.预扩增后的产物稀释至少10-20倍,有时甚至要稀释100倍才能在选扩时候扩增出来DNA条带,这样扩增出来的条带在染色的时候很清晰,而且要比不稀释时候数量要多.
所以二次PCR至少要稀释15-20倍然后在设置一个浓度梯度进行扩增,观察效果,肯定会不错的.
有时在预扩增后直接取样品做选择性扩增,条带数很少,而且在PAGE觉上染色不明显,背景很深.预扩增后的产物稀释至少10-20倍,有时甚至要稀释100倍才能在选扩时候扩增出来DNA条带,这样扩增出来的条带在染色的时候很清晰,而且要比不稀释时候数量要多.
所以二次PCR至少要稀释15-20倍然后在设置一个浓度梯度进行扩增,观察效果,肯定会不错的.