聚丙烯酰胺凝胶电泳,但是样品只停留在浓缩胶和分离胶之间?我延长了时间但是没用.分离胶4%浓缩胶7%
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/09/30 11:33:47
聚丙烯酰胺凝胶电泳,但是样品只停留在浓缩胶和分离胶之间?我延长了时间但是没用.分离胶4%浓缩胶7%
这种情况一般是分离胶太浓了,或者说蛋白比胶孔大,进不去.
你是说分离胶7%,浓缩胶4%吧?已经挺稀了,可能是蛋白沉淀了,凝聚成大块,所以进不去.这一般是样品太浓,变性时易沉淀.可以先稀释样品.
也可能是配胶时有错误,比如缓冲液pH不对,储液挥发浓缩等等.如果Marker也进不去,就是胶的问题;如果marker正常,就是样品问题.
再问: 是同工酶的,目前已经能分离到分离胶了,但是并不能在分离胶的中央。。。而且跑的时间现在是5小时了。。。。样品的稀释度是10倍
再答: “能分离到分离胶”是说已经进入分离胶,还是在分离胶与浓缩胶的界面处?如果是后者,就是蛋白颗粒太大,可能是你的同工酶本身就很大,也可能是酶凝聚了。 把信息说具体点,什么同工酶?样品浓度是多少?是变性胶吗?
你是说分离胶7%,浓缩胶4%吧?已经挺稀了,可能是蛋白沉淀了,凝聚成大块,所以进不去.这一般是样品太浓,变性时易沉淀.可以先稀释样品.
也可能是配胶时有错误,比如缓冲液pH不对,储液挥发浓缩等等.如果Marker也进不去,就是胶的问题;如果marker正常,就是样品问题.
再问: 是同工酶的,目前已经能分离到分离胶了,但是并不能在分离胶的中央。。。而且跑的时间现在是5小时了。。。。样品的稀释度是10倍
再答: “能分离到分离胶”是说已经进入分离胶,还是在分离胶与浓缩胶的界面处?如果是后者,就是蛋白颗粒太大,可能是你的同工酶本身就很大,也可能是酶凝聚了。 把信息说具体点,什么同工酶?样品浓度是多少?是变性胶吗?
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