有没有做膜蛋白提取的,

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/09/13 02:04:39

有没有做膜蛋白提取的,

膜蛋白很难做的,做得也不太多.给你一点点参考的资料

膜蛋白丰度低,难制备,表达的目标蛋白质缺乏足够的插膜及折叠过程,或者缺少翻译后修饰,异原过表达的膜蛋白质经常表达量较低或者无活性.

如果是构建成组氨酸标签的膜蛋白.
可以试试裂解缓冲液：20mM 磷酸钠,100mM NaCl,2mM MgCl2,20mM 咪唑,0.5 mM TECP,1mg/ml 溶菌酶,1mM EDTA ,1－2％的去污剂,pH7.4
His柱的结合缓冲液：20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40mM 咪唑,0.5mM TECP,1-2%
去污剂,pH7.4（合适的咪唑浓度要依不同蛋白质的特点而定,一般20-40mM 咪唑对大多数蛋白质都比较合适）.
预洗缓冲液：20mM 磷酸钠,500mM NaCl,20-40 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03％
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.
洗脱缓冲液：20mM 磷酸钠,500mM NaCl,500 mM 咪唑,0.5mM TECP,0.03％
DDM,1-2%去污剂,pH7.4.

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