琼脂糖为什么会抑制PCR反应?具体机制是什么?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/11/08 15:13:29
琼脂糖为什么会抑制PCR反应?具体机制是什么?
没听说过.PCR过程中没有琼脂糖什么事,结束后检测PCR产物会用到琼脂糖凝胶.
再问: 做菌落PCR的时候会涉及到在平板上挑克隆,如果单克隆菌落很小,很有可能会挑到一点培养基,培养基中是含有琼脂糖的,正是因为这样,菌落PCR才会出现假阴性,很多人都知道这是琼脂糖抑制了PCR反应过程,我想问的是这一抑制过程的具体机制是什么。。。。。
再答: 不清楚。你挑单克隆的平板含琼脂糖?固体LB平板是加琼脂。我曾经做载体的实验室是严格禁止菌P的,因为会出现假性结果。菌P时也很可能如果没有调上菌而失败。你要解决这个问题,可以挑单菌落要起来小提质粒PCR检测,再将阳性质粒酶切检测。酶切检测才是靠得住信得过的,PCR本身就有假阳性,还是除过挑克隆的问题。
再问: 做菌落PCR的时候会涉及到在平板上挑克隆,如果单克隆菌落很小,很有可能会挑到一点培养基,培养基中是含有琼脂糖的,正是因为这样,菌落PCR才会出现假阴性,很多人都知道这是琼脂糖抑制了PCR反应过程,我想问的是这一抑制过程的具体机制是什么。。。。。
再答: 不清楚。你挑单克隆的平板含琼脂糖?固体LB平板是加琼脂。我曾经做载体的实验室是严格禁止菌P的,因为会出现假性结果。菌P时也很可能如果没有调上菌而失败。你要解决这个问题,可以挑单菌落要起来小提质粒PCR检测,再将阳性质粒酶切检测。酶切检测才是靠得住信得过的,PCR本身就有假阳性,还是除过挑克隆的问题。
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