Easy-T-vector 与蓝白筛选
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/07 00:27:44
Easy-T-vector 与蓝白筛选
我用买来的Easy-T-vector直接转化DH5a,在IPTG-X-gal平板上只有白色菌落,无蓝色菌落.这个现象正常吗?是不是因为这个载体因末端多出T,无法自连为环状,所以LacZ基因中断无法正常表达?所以无论连接是否成功,都只有白斑没蓝斑.如果这样,为何产品说明书上还说可以做蓝白筛选?
我用买来的Easy-T-vector直接转化DH5a,在IPTG-X-gal平板上只有白色菌落,无蓝色菌落.这个现象正常吗?是不是因为这个载体因末端多出T,无法自连为环状,所以LacZ基因中断无法正常表达?所以无论连接是否成功,都只有白斑没蓝斑.如果这样,为何产品说明书上还说可以做蓝白筛选?
线性化的T-载体末端多出T,无法自连为环状,你用线性化的T-载体直接转化DH5a,T-载体进入细胞后仍然是线性的,所以质粒无法编码β-半乳糖苷酶N端的146个氨基酸,也就不能形成a-互补,所以形成白斑.但形成的白斑应该很少,因为线性化的质粒导入细胞是比较困难的.这一点是正常的.你的理解也很正确.
为何产品说明书上说可以做蓝白斑筛选呢?
因为我们用T-载体都是同外源基因连接后才导入细胞的,切线性化质粒很难导入细胞,所以几乎可以认为在IPTG-X-gal平板上出现白斑的就是阳性克隆(并非百分百是),所以说明书上也就这么说了.
为何产品说明书上说可以做蓝白斑筛选呢?
因为我们用T-载体都是同外源基因连接后才导入细胞的,切线性化质粒很难导入细胞,所以几乎可以认为在IPTG-X-gal平板上出现白斑的就是阳性克隆(并非百分百是),所以说明书上也就这么说了.
基因工程中的α互补和蓝白筛选的原理
为什么蓝白筛选时,筛选出的白色菌落要将进一步鉴定?哪些方法能确认阳性克隆?
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二维数组怎样加入到vector,先去掉与vector相同元素的部分.
蓝白斑筛选培养基怎么配啊?新手
vector< vector > v(m,vector(n)
cats are easy(容易的)to keep.我认为easy是形容词又不是动词那么easy与keep之间为什么填t
vector是什么意思?
关于t载体基因工程中常提到t载体(t-Vector),请问什么是t载体,t载体有什么作用
promise don t come easy.
Promises Don't Come Easy,
Promise Don't Come Easy