细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/02 09:17:53
细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?
1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
2.取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;
3.离心1000rpm,5min;
4.去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5.将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;
6.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;
7.冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/
min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中.也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内.
8.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞.在冻存前一天最好换一次培养液;
9.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
10.冻存和复苏最好用新配制的培养液.
2.取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;
3.离心1000rpm,5min;
4.去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5.将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml;
6.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;
7.冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/
min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中.也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内.
8.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞.在冻存前一天最好换一次培养液;
9.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
10.冻存和复苏最好用新配制的培养液.