pMD18-T上有Xho I 酶切位点吗?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/06 22:55:07
pMD18-T上有Xho I 酶切位点吗?
如果是公司刚买来的是没有的,pMD18-T由pUC18载体改建而成,在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点,用EcoR V进行酶切反应后,再在两侧的3'端添加“T”而成.因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的3'末端添加一个“A”的特性,因此可以大大提高PCR产物的连接效率,只需要将T载体与加A后的PCR产物在Solution I作用下连接即可,也可直接用快速连接酶代替Solution I.具体的可以查看pMD18-T质粒图谱
再问: 谢谢!再问刚买的pMD18-T克隆载体是线性的还是闭环的?
再答: 如上所述,T载体买来之前已经经过处理,用EcoR V进行酶切后在两侧的3'端添加“T”而成,所以是线性的,这也是为什么能直接用于连接反应的原因。
再问: 谢谢!再问刚买的pMD18-T克隆载体是线性的还是闭环的?
再答: 如上所述,T载体买来之前已经经过处理,用EcoR V进行酶切后在两侧的3'端添加“T”而成,所以是线性的,这也是为什么能直接用于连接反应的原因。
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