做western蛋白样品用什么稀释

不知道分子量的情况下就尽可能选择浓度高的分离胶,因为浓度低的胶很有可能蛋白就跑出去了.先用高浓度的胶跑一次,然后看条带再调整下分离胶浓度再做一次就行了.另外,一般快速测定蛋白浓度的方法就是用分光光度计

只看marker也不可靠吧?还是用ponseauS（丽春红）给膜上的蛋白质显色看一下到底如何.另外膜上没有marker的话,胶上还看得到marker吗?如果还在胶上,那么蛋白质可能也还在胶上,可以改变

如果marker跑在胶上的话说明胶是没问题的,要么是你样品蛋白含量太低,可以将样品浓缩一下,也可以加大上样量；或者可能你配的胶的浓度有问题,这样样品可能跑不开,建议根据蛋白的分子量按照分子克隆选用分离

鼠标移动至标准曲线上方,右键出菜单,选择“addtrendline添加趋势线”,去“option选项”,在“displayequationonchart在图中显示方程”旁打勾.然后用方程带入吸光度值求

以6孔板的一个孔为例,先把培养液吸出,加入200ul的细胞裂解液,摇床摇15分钟,加loadingbuffer冰上放置5分钟,用细胞刮把皿底刮几次,然后全部吸出放到离心管里,95°水浴或者金属浴煮10

计算出样品及buffer的体积,加水补足到25ul再问：那我能不能先把浓度确定了，然后加等体积的样？如果可以，用什么来稀释蛋白？再答：我的意思是：根据你的蛋白样品的浓度以及上样克数计算出你需要的样品体

六孔板的话每孔250别的你看着算吧

将细胞平板取出置于冰上,用PBS洗两次,加入200μl预冷细胞裂解液,短暂孵育后用细胞刮子刮下细胞,将细胞碎片及裂解液移入1.5mlEP管中,冰上孵育20分钟,期间漩涡振荡3次,于4℃离心12000r

只用sephadex分离效果很差的,特别是分子量差异比较小的时候,基本没有什么分离效果.可以先过离子交换柱：阴离子交换和阳离子交换,这样能除掉很多的蛋白,在过sephadex.

分子量很小的多肽不适合,比方说就十几个氨基酸的；当然分子量太大了也不好做,比方说好几百KD的.

用1Xloadingbuffer稀释即可.

煮沸时间不够使得蛋白质变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过（貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的--|||）,不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也

需要纯净水稀释

主要看你用什么方法转膜,如果用湿转的话,胶浓度高点也没有问题,12%的分离的效果会很好的.但是如果要用半干转,还要保证90多k的蛋白的转印效率的话,建议适当调低分离胶的浓度,这样可以保证大蛋白出胶,达

一般不用测用内参来半定量就可以了缓冲液是为了帮助蛋白迁移呗再问：谢谢您！用相同浓度的样本点样是不是更好点谢谢！再答：那肯定的不过只要相差不大就没关系因为最后定量的时候都要比上内参的

注意实验员的身体健康

在SDS-PAGE电泳前,一般样品加入上样缓冲液中并煮沸5~10分钟,让蛋白样品变性并带上一定电荷,使蛋白迁移速度只与分子量相关,这样才能将不同的蛋白通过电泳尽量的区分开来.这个过程中,会打断一些分子

取决于蛋白降解的程度,如果不完全降解,出来的条带肯定会很暗；如果完全降解了,根本就没条带

蛋白是你自己提取的,比如给药后去血清然后制备诚蛋白样品,抗体是用来看你的作用结果的.你需要区分什么?再问：恩！那就是说抗体是用来使我要的蛋白显像，作定性或者定量用的咯？而蛋白是我的研究对象，而不是外购

1,通过电镜或X-射线衍射等方法对其结构进行分析.2,功能分析：检测能否与其受体或配体结合.3,酶解法再问：请问能详细解释下吗，多谢了再答：蛋白在电场中的迁移速率与其所带电荷以及分子量大小有关，设计实