内参没有目的基因条带亮-搜答案-智慧作业帮

我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!

如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件：1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列；2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有

既然其他样本有结果,说明引物没有问题.而该样本GAPDH也有,说明cDNA没有问题.PCR试剂也OK.目的基因在这个样本中表达很低.如果是做定量的话建议用realtime.这样肉眼看不到的也可以由荧光

当然不一定,比如说你的目的基因的copynumber高或者PCR的效率高都会使得beta-actin的条带不如目的基因的条带亮

上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime

就是你那样做的.亮的就稀释模板,上样量当然要保持

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

可以鉴定出两种状态下细胞总RNA样品内A基因量的差异,但这个差异包含着误差：1,总RNA量的不准确性,虽然用分光光度计计算了浓度,但实际上还是有误差的存在,对那些表达水平只差那么丁点儿的样品尤其关键；

提交不了答案.不要调一致把内参也检测了

为啥要把内参调一致呢你每次都也检测一下内参不就好了然后用目的基因的比上内参一般很少有什么调一致的吧.

那是内参引物可能有问题,建议重新设计内参引物

一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loadingbuffer后加热（90度以上）一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大（不一定是目标产物）再问：我做的是菌落PCR电泳检测结果，我

1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料

啥叫不同阶段只要模板不同就要检测内参标准曲线是指拿已知浓度的标准品做出来的曲线不是一个概念

这个概念一般是用在定量PCR中.定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差（比如提RNA时的损失）,所以这个

不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量（CT值差）过大,用内参基因来衡量目标基因的

这样子调内参基因的条带似乎是不严谨的．理论上来说,如果你用相同总量的cDNA或DNA模板,并用相同的内参基因引物对,相同实验条件和循环次数,你应该得到相同的内参基因条带,这才能证明你的每次实验操作是可

发个照片看看.

我不了解你的实际情况,我给你几条建议：1.可能是内参引物有问题2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?

楼上的大哥,我的神啦,内参如果不是用同样退火温度,不是跟被测基因同时p的话,还好叫内参的吗?不过这得怪楼主没有说清楚,RT是反转录还是说realtime的定量PCR啦?如果是反转录的话,好像是叫loa