转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/07/08 19:20:57

转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.
1.提质粒最后一步用的是elution buffer而不是水，这样有什么影响，如果有影响，现在如何补救？2.28a空质粒的位置应该跑在什么位置，提的质粒与空质粒的位置比较如何？3.双酶切验证的时候我只切了一个小时，有没有必要多切一些时间？做了两个月了都没做出来。请多指教！

我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.
提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑.然后看大小比较.
酶切的话还是要看你的酶的活性.要是快切酶的话只要五分钟,要是慢的话要三四个小时.（我用的是takara的）是不是你酶切的量太少了,我一般50ul的体系要酶切1ug以上的,还要多跑跑,跑个十分钟以上吧.
我也做了个克隆用了很长时间,实在不行就买点贵的酶,能保证一次成功呀.

转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀菌液pcr可以拉出目的条带,但是质粒抽出来酶切结果说是没有插进去,为什么? PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! PCR目的条带的问题, 菌液pcr检测目的条带很明显但是有弱杂带是怎么回事【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常. PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出? RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些?