菌落PCR跑电泳点样孔中很亮是什么原因造成的

有时候溶解曲线看上去是很特异的,而电泳却能跑出两条带；加内参是为了做表达比对,跟内参比,这样才能知道是高表达还是地表达,也可以作为判断PCR反应过程是否顺利的依据.

菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水（1半保存）,分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量.　　有杂带,建议提高T

博凌科为生物科技-为你直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~

高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带；当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以

个人觉得有几个原因：1.可能凝胶没有融化好,里面有小颗粒.2.胶没有完全凝固就拔梳子和跑电泳.3.梳子没洗干净,上面可能有脏东西污染了样品孔；4.DNA稍微有点多,用一半量应该可以了.5.电泳电压有点

600是多在中间,还是加在一头?其他的序列还一样吗?说具体一些如果是在中间,扩增的是cDNA的话,有可能是mRNA的alternativesplicing

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

可以的.我们验证转化结果时就是根据这个原理的,只不过一般是扩增质粒内的基因,但如果有正确的引物,同样可以扩增基因组上的基因的关于单菌落的处理,一般是把菌落挑到无菌水里,然后沸水煮5min就可以了,目的

是不是接触不良,中间通电不好?说明你的样根本就没开始跑孔不小心穿通了,会影响跑的距离,结果不准确

若是普通PCR,做完以后要通过电泳鉴定目的片段的大小是否为想要的,条带的亮度可以反映模板的两是否足够,也可以看是否存在引物二聚体,借此优化PCR条件和体系若是RealTimePCR,尽管可以直接看显示

可能PCR反应进行的不好,没有得到充足的DNA片段建议改善反应条件,重做一便．

首先看你的MARK亮不亮,如果MARK不亮的话说明EB少了,多加点EB.如果MARK亮的话,那就是你的PCR产物浓度不够,这个就原因多了1、增加引物浓度2、增加PCR循环数3、降低PCR退火温度以提高

如果你切的是PCR产物的两端,那么跑胶是看不出来区别的.选择这样只是因为方便,酶切的效率要取决于保护碱基、酶的质量等等,一般根据经验切完之后,挖胶回收,如果产物带很特异的话,直接PCR产物回收也可以（

电泳的目的是看DNA片段的长度,而电泳上DNA移动速度除了受片段长度的影响还受到其结构的影响.让DNA变性,所有样品都是线形DNA.这时所有电泳上所有DNA的移动速度只和其长度有关.

PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来的东西跑个胶看一看.如果抽出来了,但是PCR没跑出来,就把模板浓度降低一下；如果DNA没跑出来,就要从抽提步骤上找问题.你们用

现在PCR用的Taq酶只能以DNA为模板,不能以RNA为模板.所以你不能用RNA代替cDNA.再问：但是我用RNA代替cDNA，结果很多基因都扩增出来了，难道说我提的RNA全部污染了DNA。再答：　　

试剂盒应该没有问题,因为不久前还用,都提出来了.而且因为提不出来,就PRC跑不出来先考虑是不是模板的问题,是不是DNA没有抽出来,可以把抽出来再问：我提出来的DNA杂质太多，PCR过后电泳，拖尾现象严

用dl2000marker的话,在750bp（从上往下第三条带）和1000bp（第四条带）之间,

为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.如果样本只是一个菌,

建议你购买专门的细菌抽提试剂盒,或者在菌液中加入胰蛋白酶37度消化半小时