CTAB提取植物中DNA步骤是什么?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/14 08:45:06
CTAB提取植物中DNA步骤是什么?
1、从2ml离心管中取样至小离心管中,加钢珠
2,放入液氮冷冻30S,放入震荡机震荡
3.加200微升CTAB(56度),56度恒温水浴30Min.
4.加入200微升氯仿异戊醇混合液,体积比24:1
5.震荡,放入摇床30Min
6,离心12000/10min,取上层清液70微升至2ml离心管,滴加47微升异戊醇(冷冻)
7,加盖,写码,震荡,4度离心12000/10min
8,倒去液体,晾干,加入200微升ddH2O
最好细节再给一下!
1、从2ml离心管中取样至小离心管中,加钢珠
2,放入液氮冷冻30S,放入震荡机震荡
3.加200微升CTAB(56度),56度恒温水浴30Min.
4.加入200微升氯仿异戊醇混合液,体积比24:1
5.震荡,放入摇床30Min
6,离心12000/10min,取上层清液70微升至2ml离心管,滴加47微升异戊醇(冷冻)
7,加盖,写码,震荡,4度离心12000/10min
8,倒去液体,晾干,加入200微升ddH2O
最好细节再给一下!
1)取材料,加液氮研磨成粉末状,迅速移入1.5 ml Eppendorf管中;
(2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿(各400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min.
(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;
(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次;
(8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用.
(2)加入800 μl的CTAB提取缓冲液,混匀(CTAB在65℃水浴预热),每5min轻轻震荡几次,20min后12000 r/min,离心15 min;
(3)小心吸取上清液,加入等体积的酚:氯仿(各400μl)溶液,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(4)小心吸取上清液,加入等体积的氯仿,混匀,4℃,12000 r/min,离心10 min.
(5)重复步骤(4)1-2次,以蛋白层不出现为止;
(6)取上清,-20℃沉淀1h,4℃,12000 r/min,离心10 min;
(7)弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀2次;
(8)室温下干燥后(一般干燥5-15 min),溶于30-50 μl DEPC去离子水中,于-20℃或者-70℃下保存备用.
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