作业帮蛋白纯化的问题我是用镍柱纯化的蛋白 非自然条件下的 包涵体的 但是跑sds-page没有条带或者是很不清楚,今天跑的什么
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/08 23:52:44
蛋白纯化的问题
我是用镍柱纯化的蛋白 非自然条件下的 包涵体的 但是跑sds-page没有条带或者是很不清楚,今天跑的什么都没有 连marker都没有 电泳液 配胶的液体都是重新陪的 ph也条了
我是用镍柱纯化的蛋白 非自然条件下的 包涵体的 但是跑sds-page没有条带或者是很不清楚,今天跑的什么都没有 连marker都没有 电泳液 配胶的液体都是重新陪的 ph也条了
敢问您是用什么洗脱的?
有没有用紫外检测,是否出了蛋白峰?
sds-page时样品中有无盐酸胍?若有盐酸胍,跑不出来是正常的.
再问： 那盐酸胍怎么能去除啊？？
再答： 如果你的buffer里面没有盐酸胍，就不存在去除的问题了，如果有，我们一般是用梯度洗脱的办法.
再问： 我是用盐酸胍作为裂解液（我的是包涵体蛋白），裂解完后超声波破碎，然后就过镍柱纯化的。。梯度洗脱是怎么做啊，麻烦你具体一点呗！谢谢~
再答： 盐酸胍的主要作用不是裂解液而是作为变性剂，溶解包涵体蛋白。既然你的是包涵体蛋白，就涉及蛋白复性的问题，我们的蛋白在复性时，采用的是梯度复性，也就是配一系列（6-10个梯度）从高（100%）到低（0%）的盐酸胍溶液，过柱子，这个过程中，盐酸胍逐渐清除，蛋白也复性了（可能不会适用于每种蛋白，视你的蛋白性质），最后再把蛋白洗下来，不就没盐酸胍了，蛋白也复性了。 回到你问题的开始，你样品中有盐酸胍，sds-page是肯定跑不好。有问题把你的qq发消息告诉我，我们可以继续讨论。
有没有用紫外检测,是否出了蛋白峰?
sds-page时样品中有无盐酸胍?若有盐酸胍,跑不出来是正常的.
再问： 那盐酸胍怎么能去除啊？？
再答： 如果你的buffer里面没有盐酸胍，就不存在去除的问题了，如果有，我们一般是用梯度洗脱的办法.
再问： 我是用盐酸胍作为裂解液（我的是包涵体蛋白），裂解完后超声波破碎，然后就过镍柱纯化的。。梯度洗脱是怎么做啊，麻烦你具体一点呗！谢谢~
再答： 盐酸胍的主要作用不是裂解液而是作为变性剂，溶解包涵体蛋白。既然你的是包涵体蛋白，就涉及蛋白复性的问题，我们的蛋白在复性时，采用的是梯度复性，也就是配一系列（6-10个梯度）从高（100%）到低（0%）的盐酸胍溶液，过柱子，这个过程中，盐酸胍逐渐清除，蛋白也复性了（可能不会适用于每种蛋白，视你的蛋白性质），最后再把蛋白洗下来，不就没盐酸胍了，蛋白也复性了。 回到你问题的开始，你样品中有盐酸胍，sds-page是肯定跑不好。有问题把你的qq发消息告诉我，我们可以继续讨论。
蛋白纯化的问题我是用镍柱纯化的蛋白 非自然条件下的 包涵体的 但是跑sds-page没有条带或者是很不清楚,今天跑的什么
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