我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：数学作业时间：2024/10/04 23:38:26

我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢
因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能解决呢?

这个要看你的实验目的了,你可以根据引物设计时给出的退火温度前后各十度做个温度PCR,然后选择能扩出带的温度.如果二聚体对实验影响较大的话则建议你换引物吧.
再问：请问，您的意思是？在引物设计给出的退火温度基础上，加10度和降10度做PCR吗？我怕的就是55度都没有出条带，那么温度更高了，会不会更没有条带呢？
再答：对，软件给出的退火温度只能作为一个参考，实际的退火温度我们都是通过温度梯度PCR测出来的，鉴于你的样品在55度未扩增可以退几个温度试试。祝你顺利！

我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 引物的退火温度如何计算,用tm值减去5度,靠谱不?用1m na+的还是50mmna+? 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! tm值与退火温度[求助]我想进行引物的特异性检验,进入primer-blast,怎么设置一些相关参数?我想进行引物的特异我的引物该如何选择?我要设计兼并引物,但是两个最佳位置处的引物Tm值相差较大,而且有二聚体和发卡结构,其余的位置兼并位点 RT-PCR,自己前后引物Tm差7度,前引物63度,后引物58度,退火温度如何设置? TAILPCR 反应体系中退火温度一般是多少和特异引物的TM值有什么关系吗谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢? 带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物g