作业帮引物的EB染色问题最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/10/04 22:54:02
引物的EB染色问题
最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.
在此想问问各位同行高手,对于短的ssDNA,EB染色是否与DNA序列有关?如果有关,都有些什么关系?
回fengfeixue0219:我是拿引物直接跑的PCR.
谢谢各位的回答,其实你们说的我也查过,我想问的是染色的强弱跟DNA序列都有些什么关系?
多谢fengfeixue0219,以后设计引物得更小心了.
最近做PCR,很不顺心,以为是引物问题.拿引物去跑电泳,发现很多条跑不出带,从而以此断定为引物问题.于是重新合成引物,电泳检测,仍然是相同的结果.
在此想问问各位同行高手,对于短的ssDNA,EB染色是否与DNA序列有关?如果有关,都有些什么关系?
回fengfeixue0219:我是拿引物直接跑的PCR.
谢谢各位的回答,其实你们说的我也查过,我想问的是染色的强弱跟DNA序列都有些什么关系?
多谢fengfeixue0219,以后设计引物得更小心了.
EB的染色原理是能够嵌入到dsDNA的大沟之中,形成复合物而在紫外光下发出荧光.
引物是ssDNA,如果不能形成二级结构的话,EB是不能有效染色的.
你指的跑不出带,是指PCR结束后没有引物二聚体,还是引物直接电泳没有条带?
说实话,EB染色和序列碱基次序是没有关系的.EB的染色只和序列长度有关.并且我要指出的是,如果你的引物能够跑出很强的带,那说明引物可以形成发卡装二级结构,不适合作为引物使用.因为引发率会很低.
引物是ssDNA,如果不能形成二级结构的话,EB是不能有效染色的.
你指的跑不出带,是指PCR结束后没有引物二聚体,还是引物直接电泳没有条带?
说实话,EB染色和序列碱基次序是没有关系的.EB的染色只和序列长度有关.并且我要指出的是,如果你的引物能够跑出很强的带,那说明引物可以形成发卡装二级结构,不适合作为引物使用.因为引发率会很低.