作业帮如何将细胞周期的蛋白提出来
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/07 23:57:23
如何将细胞周期的蛋白提出来
能说的具体一些么?比如什么细胞?有什么要求?
如果是从菌中提蛋白 本人比较有经验.
再问： 细胞周期蛋白，例如cyclinE,CDK1等
再答： 我说说提蛋白的总体思路吧，首先你应该查查蛋白的性质，比方说你这两个蛋白的cDNA序列，这个你老板那里应该有吧，管他要，然后自己设计引物，扩增编码蛋白的DNA片段，设计完之后PCR，通过了之后不就拿到你的目的片段了么，（设计引物的时候5‘端放上酶切位点）然后选你们实验室常用的载体，一般PET系列比较常见吧，然后双酶切，连接，把你的目的片段连到载体上，制备感受态，转化，一般大肠杆菌最常见，你可以先试试BL21，不行换Rosseta，转化到表达菌株中之后，培养，长点了之后大摇，OD0.8左右诱导，加IPTG，然后你就得找条件了，看看蛋白是包涵体还是上清表达了，诱导时间也得摸索，到了诱导时间之后，收菌，超声破碎离心，你的蛋白就在上清里了，然后根据你蛋白的性质，选择各种纯化手段。这里边环环相扣，复杂的挺多，我就是说了个大概，不知道你要的是这方面的不。希希望能够帮助到你。
如果是从菌中提蛋白 本人比较有经验.
再问： 细胞周期蛋白，例如cyclinE,CDK1等
再答： 我说说提蛋白的总体思路吧，首先你应该查查蛋白的性质，比方说你这两个蛋白的cDNA序列，这个你老板那里应该有吧，管他要，然后自己设计引物，扩增编码蛋白的DNA片段，设计完之后PCR，通过了之后不就拿到你的目的片段了么，（设计引物的时候5‘端放上酶切位点）然后选你们实验室常用的载体，一般PET系列比较常见吧，然后双酶切，连接，把你的目的片段连到载体上，制备感受态，转化，一般大肠杆菌最常见，你可以先试试BL21，不行换Rosseta，转化到表达菌株中之后，培养，长点了之后大摇，OD0.8左右诱导，加IPTG，然后你就得找条件了，看看蛋白是包涵体还是上清表达了，诱导时间也得摸索，到了诱导时间之后，收菌，超声破碎离心，你的蛋白就在上清里了，然后根据你蛋白的性质，选择各种纯化手段。这里边环环相扣，复杂的挺多，我就是说了个大概，不知道你要的是这方面的不。希希望能够帮助到你。