western blot 试验中蛋白转膜总是颜色很浅.分子量是27KD,电流和电压多少合适,应该转多长时间.
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/08/27 08:21:20
western blot 试验中蛋白转膜总是颜色很浅.分子量是27KD,电流和电压多少合适,应该转多长时间.
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(1)通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60)分钟.也可以在15-20mA转膜过夜.转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时).具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短.
(2)在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜.
(3)转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上.转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色,以观察实际的转膜效果.也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色,以观察蛋白的残留情况.
(1)通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60)分钟.也可以在15-20mA转膜过夜.转膜时也可以使用碧云天的多功能电泳仪(带定时).具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短.
(2)在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜.
(3)转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上.转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色,以观察实际的转膜效果.也可以用考马斯亮蓝快速染色液对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色,以观察蛋白的残留情况.
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