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sds-page电泳为什么跑不出蛋白条带?连marker的也没有.请高手指教,详细一点.

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/11/09 02:50:28
sds-page电泳为什么跑不出蛋白条带?连marker的也没有.请高手指教,详细一点.
上样的缓冲液我用的是2×的,与样品混合后100℃水浴10min,加样我加了10ul。应该没有漏胶,因为溴酚蓝跑得挺正常的。求高人继续点播。
还有就是电极缓冲液(1 X pH8.3 ): Tris (25mM ) 3g,甘氨酸(250mM)14.4g, SDS
1g定容至1 L,室温下长期保存。再加入Tris、甘氨酸和SDS后还需要调pH吗?
染色液和脱色液不用甲醇和乙酸而改用乙醇和乙酸行吗?
上样缓冲液混合后进行变性,温度必须要超过95°,时间5—10min,如果没把握,可以处理10min.也有可能是漏胶,制胶时封胶要严,操作不熟练时可以多加一点,待聚合后用去离子水加入电泳槽内,看看是否会漏,如果不会把水倒掉,滤纸吸干后再加入凝胶.加样的问题,加样时注意不要刺破凝胶,以避免样品直接漏出.