为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：化学作业时间：2024/07/05 09:30:24

为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了
marker是彩色
转移缓冲液配比：
甘氨酸（MW75.07） 2.9g,Tris（MW121.14） 5.8g,SDS 0.37g,甲醇 200ml,蒸馏水至 1000ml.
转移缓冲液在冰箱冷冻,没有结冰.
膜用甲醇处理15秒,水洗一次.
转膜温度,十度左右,80v两小时
转膜之后,胶上没有颜色.

不排除是预染Marker质量又问题
再问： marker没有问题，实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的，所以实验过程和仪器与他们不是很相同
再答：那建议你在适当延长一下转膜的时间吧，三、四个小时都可以的。
再问：用抗体检测过之后，150kd的蛋白都转过去了，各种大小的蛋白都有转过去。也正常，marker应该不会需要太长时间。我转膜时上下的滤纸有接触，会影响marker的转膜吗？
再答：滤纸接触不会有任何影响，既然大分子蛋白转过去了，说明一定是你的预染Marker是有问题的，一般预染Marker上样之前也要用水煮一下的，再用就是是不是你的用量少了呢？
再问：用量不少，不过marker没有煮过，预染的应该不用煮吧也许这是问题所在吧
再答：嗯，多加一些，至少也得6uL，我们用的时候都煮一下的。

为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上的预染Marker就变的很歪,非常歪.并 Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊? pcr电泳结果特别不清晰,条带很模糊连MARKER也看不清上样孔很亮,不加任何东西的上样孔都很亮我跑出来的PCR目的条带很清晰,但是marker很暗,每个加样孔都一样的暗做Western Blot 跑电泳之后的胶上Marker的条带,比较清晰,但与模板Marker的条带却对应不上,而且少一 PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常. PCR电泳,为什么没有条带啊? pcr电泳带看不清楚我们一共四个组做了这个实验,marker很清晰,就是我们的结果都没有或者是看不清,这是怎么回事,除了 western blot 转膜之后用丽春红进行染色,可以看到条带都转过去了~但是最后做不出来~ CTAB法提取水果DNA时,可以看到清晰的RNA条带,但是DNA没有条带,为什么? 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么?