作业帮如何使基因在原核生物中表达
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/07/03 15:30:08
如何使基因在原核生物中表达
1.获取目的基因：最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收.
2.酶切和连接：找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切.把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接.
3、转化：找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去.
4、检验（筛选培养）：看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳.
5、诱导表达：加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc.
完了,具体问题具体分析,思路以上.
2.酶切和连接：找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切.把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接.
3、转化：找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去.
4、检验（筛选培养）：看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳.
5、诱导表达：加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc.
完了,具体问题具体分析,思路以上.