引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：数学作业时间：2024/07/07 14:27:25

引物18个碱基互补序列,Tm值60左右,加上酶切位点和保护碱基后,Tm值就72了,这么高Tm行吗?
能帮我看下,这样设计的引物对吗ATGC TCTAGA GC TCAGATGTCCACGTCCCG前面四个和第11、12个（GC）是保护碱基,中间6个是酶切位点,后面20个是互补序列,我不确定在酶切位点后面还需不需要要加保护位点?

酶切位点后面紧接的引物其实就是保护碱基,所以后面的保护碱基可以去除,去掉这两GCTm肯定会降低的

为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀? 带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不引物的Tm值是什么我在做overlap PCR,两个片段一条736bp,一条255bp,20个重叠碱基,四个引物的TM值都是59度,两条都 miRNA的qPCR的引物Tm值有什么要求吗?60℃左右行吗,还是上游引物需要高点啊? 请教如何计算引物的Tm值? 引物的TM值如何计算如何计算引物的Tm值? 下列是几种DNA分子的碱基组成比例,那一种DNA的Tm值最高?为什么? 退火温度与引物的TM值有什么联系?为什么退火温度要比TM低5度左右最合适? TEXTMETRIC tm成员tm.tmpitchAndFamily作用?它的值如何理解Tm= 4(G+C)+2(A+T).比如说一段引物的G+C含量为40%,那么这段引物的Tm值是多少?