兼并引物如何设计?

我的引物该如何选择?我要设计兼并引物,但是两个最佳位置处的引物Tm值相差较大,而且有二聚体和发卡结构,其余的位置兼并位点 如何进行引物设计! 请教如何计算出兼并引物的退火温度 兼并引物 RT-PCR PCR中引物如何设计, 如何进行pcr引物设计? 巢氏PCR引物如何设计? 黄颡鱼肿瘤坏死因子的基因兼并引物怎么设计啊?急. 如何设计引物超表达基因的全长引物? PCR引物设计不好,如何提高引物特异性? 如何设计real-time PCR 引物 RT-PCR的引物如何设计?