作业帮 > 生物 > 作业

基因与载体高效重组连接需要的条件

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/07 09:09:41
基因与载体高效重组连接需要的条件
1.如果是采用粘性末端连接法的话应该防止载体的自身环化,可以用细菌或小牛肠的碱性磷酸酶预先处理线性的载体DNA分子,去除线性载体DNA两端的5端磷酸基团,这样,在连接反应中,载体DNA的两个末端之间就无法被连接酶共价连接了.
2.如果是采用的定向克隆法的话就不用考虑载体的自身环化.
3.如果是平末端连接法,就要满足a.具有高浓度的T4DNA连接酶b.高浓度的平末端外援DNA连接和质粒DNAc.低浓度的ATPd.不存在亚精胺一类的多胺.