PCR获得基因转入连接病毒载体到最后重组载体导入细胞全过程.

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/07/13 21:41:01

PCR获得基因转入连接病毒载体到最后重组载体导入细胞全过程.
菜鸟初习细胞方面的基因工程,想知道PCR目的基因连接病毒载体后,病毒为什么还要包装,包装的目的是什么?而包装后的病毒为什么就被宿主细胞释放出来后,转染新的宿主细胞就不会导致新的宿主细胞的死亡.新手求教,拜谢!

你这个详细的,可以详细成一本书了,我就粗略给你说说哈~
先理解个概念,你所说的一个病毒载体是不能进行病毒包装的,病毒包装时还需要多个辅助质粒才行.病毒包装所需要的蛋白等其他关键元件都在辅助质粒上.
首先,PCR目的基因连接病毒载体后,病毒为什么还要包装,包装的目的是什么?
病毒载体构建完成后,可以不进行包装,直接转染细胞,也可以到达构建稳转株或者基因敲除的效果,但是效率非常低,因为有些细胞非常难转染.所以要先转染好转染的细胞,包装成病毒,然后再感染相应的靶细胞,就可以达到较好的效果.
其次,包装后的病毒为什么就被宿主细胞释放出来后,转染新的宿主细胞就不会导致新的宿主细胞的死亡?
你病毒加多了,也会导致细胞的死亡,或者病毒所携带的外源基因对宿主细胞有毒性,更会导致细胞状态不佳,甚至死亡.而包装后的病毒感染细胞是一次性的,感染宿主细胞后,不能进行再次包装.这是为了实验安全性考虑.
再问：今天搞明白了一个问题，病毒包装好后是通过胞吐的方式将病毒释放到胞外，并不会裂解细胞，导致其死亡。而因为病毒质粒本身没有表达外壳等蛋白的基因，所以，包装好的病毒感染新的细胞后，并不会重新发生包装的过程，而只会病毒本身整合到宿主的基因组中去，而整合的位置是随机的，之后病毒本身随着宿主的增殖而增殖，或者表达相关的蛋白。这个病毒应该是慢病毒，请问您可以告诉我腺病毒的包装也是为了提高转染率？以上理解对吗？
再答：也就是说，你还没有动手开始做么？病毒包装好后是通过胞吐的方式将病毒释放到胞外，并不会裂解细胞，导致其死亡。--理论没错，实际上感染后，有时细胞还是会死。病毒质粒本身没有表达外壳等蛋白的基因，所以，包装好的病毒感染新的细胞后，并不会重新发生包装的过程，而只会病毒本身整合到宿主的基因组中去，而整合的位置是随机的，之后病毒本身随着宿主的增殖而增殖，或者表达相关的蛋白。--对的。包装出来的慢病毒是复制缺陷型的，整合入细胞基因组的是3'LTR和5'LTR之间的片段，也只有这个片段是进入病毒的。整合的位置时随机的，但是偏向于在转录旺盛的区域，不容易致癌（参照HIV）。腺病毒的包装也是提高转染率，但是腺病毒只能瞬时转染和表达，不能构建稳转株。
再问：感觉你懂好多，我之前做的是细菌方面的，现在到了新单位改做细胞方面的，对病毒感染这一块懂的非常有限，最近老板催的急，所以比较着急，楼主可不可以告诉我你的QQ或者邮箱？想方便以后向你请教~我的QQ948300130

PCR获得基因转入连接病毒载体到最后重组载体导入细胞全过程. 将目的基因导入动物细胞用到的载体只能是病毒吗?质粒可以吗? 目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,预测重组子的目的基因PCR电泳图目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,请预测重组子的目的基因PCR电泳目的基因须由载体导入受体细胞如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢? 目的基因导入受体细胞是怎样进行的?如何防止目的基因与质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接?请基因表达载体的构建与将目的基因导入受体细胞的区别? 目的基因经特定载体进行拼接重组DNA可能有：目的基因-目的基因目的基因-载体载体-载体外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班? 请问将目的基因导入受体细胞中的基因枪法,是将金属粒子（被表达载体包裹）打入到细胞内? 用质粒做载体将目的基因导入受体细胞后怎么办?